主要英文缩写词 | 第1-9页 |
中文摘要 | 第9-13页 |
英文摘要 | 第13-17页 |
第一章 文献综述 | 第17-52页 |
第一节 嗜热酶热稳定性机制研究进展 | 第17-35页 |
1 嗜热酶的定义 | 第17页 |
2 嗜热酶的热稳定性 | 第17-18页 |
3 影响酶热稳定性的因素 | 第18-35页 |
·蛋白质分子内有更多的作用力 | 第19-23页 |
·更好的蛋白质构型 | 第23-30页 |
·优化氨基酸组成 | 第30-35页 |
第二节 β-葡聚糖酶的研究进展 | 第35-50页 |
1 前言 | 第35-36页 |
2 β-葡聚糖酶的分子生物学研究 | 第36-39页 |
·β-葡聚糖酶基因克隆 | 第36-37页 |
·β-葡聚糖酶基因表达 | 第37-39页 |
3 β-葡聚糖酶的生化特性 | 第39页 |
4 结构与功能 | 第39-43页 |
·酶的作用机理 | 第39-40页 |
·催化氨基酸残基 | 第40-41页 |
·三级结构和折叠 | 第41-43页 |
5 突变研究和蛋白质工程 | 第43-50页 |
·蛋白质和碳水化合物的相互作用:底物特异性 | 第43-46页 |
·杂合酶与热稳定性 | 第46-48页 |
·循环重排 | 第48-50页 |
第三节 本研究目的和意义 | 第50-52页 |
第二章 热纤维梭菌β-葡聚糖酶C-末端结构域对其热稳定性的影响 | 第52-70页 |
1 材料和方法 | 第53-62页 |
·材料 | 第53页 |
·培养基及主要化学试剂的配制 | 第53-55页 |
·方法 | 第55-62页 |
·热纤维梭菌β-葡聚糖酶成熟肽基因的表达 | 第55-60页 |
·热纤维梭菌β-葡聚糖酶成熟肽缺失基因的表达 | 第60页 |
·SDS-PAGE | 第60-62页 |
·β-葡聚糖酶活力测定 | 第62页 |
·β-葡聚糖酶特性的分析 | 第62页 |
2 结果 | 第62-66页 |
·β-葡聚糖酶成熟肽(LicMB)及其二个缺失酶基因的克隆 | 第62-63页 |
·LicMB及其二个缺失酶基因的表达 | 第63-64页 |
·LicMB及其二个缺失酶的活力 | 第64-65页 |
·LicMB及其二个缺失酶的最适作用温度 | 第65页 |
·LicMB及其二个缺失酶的热稳定性 | 第65-66页 |
3 讨论 | 第66-69页 |
·酶的表达 | 第66-67页 |
·LicMB及其二个缺失酶的活力 | 第67-68页 |
·LicMB及其二个缺失酶的最适温度 | 第68页 |
·LicMB及其二个缺失酶的热稳定性 | 第68-69页 |
4 小结 | 第69-70页 |
第三章 LieMB-CD N-和C-末端缺失对其热稳定性的影响 | 第70-85页 |
1 材料和方法 | 第70-73页 |
·材料 | 第70页 |
·方法 | 第70-73页 |
2 结果 | 第73-79页 |
·LicMB-CD N-或C-末端缺失基因的克隆 | 第73-74页 |
·LicMB-CD N-和C-末端缺失基因的表达 | 第74-75页 |
·LicMB-CD N-和C-末端缺失酶的活力 | 第75页 |
·LicMB-CD N-和C-末端缺失酶的最适作用温度 | 第75-77页 |
·LicMB-CD N-和C-末端缺失酶的热稳定性 | 第77-79页 |
3 讨论 | 第79-83页 |
·LicMB-CD N-末端氨基酸缺失对酶特性的影响 | 第79-81页 |
·LicMB-CD C-末端氨基酸残基缺失对酶特性的影响 | 第81-82页 |
·酶的亲热性和耐热性 | 第82-83页 |
4 小结 | 第83-85页 |
第四章 LicMB-CD N末端氨基酸突变对其热稳定性的影响 | 第85-95页 |
1 材料和方法 | 第85-87页 |
·材料 | 第85页 |
·方法 | 第85-87页 |
2 结果 | 第87-91页 |
·LicMB-CD N末端突变基因的克隆 | 第87页 |
·LicMB-CD N末端突变基因的表达 | 第87-88页 |
·LicMB-CD N末端突变酶的活力 | 第88-89页 |
·LicMB-CD N末端突变酶的热稳定性 | 第89-91页 |
3 讨论 | 第91-94页 |
4 小结 | 第94-95页 |
第五章 LicMB-CD末端序列对芽孢杆菌β-葡聚糖酶热稳定性的影响 | 第95-108页 |
1 材料和方法 | 第95-98页 |
·材料 | 第95页 |
·方法 | 第95-98页 |
2 结果 | 第98-103页 |
·杂合β-葡聚糖酶基因的克隆 | 第98页 |
·杂合β-葡聚糖酶基因的表达 | 第98-100页 |
·杂合β-葡聚糖酶的活力 | 第100-101页 |
·杂合β-葡聚糖酶的最适作用温度 | 第101-102页 |
·杂合β-葡聚糖酶的热稳定性 | 第102-103页 |
3 讨论 | 第103-107页 |
·LicMB-CD N7C3对β-葡聚糖酶特性的影响 | 第103-104页 |
·LicMB-CDN端氨基酸残基对β-葡聚糖酶特性的影响 | 第104-106页 |
·LicMB-CD C-末端氨基酸残基对β-葡聚糖酶特性的影响 | 第106-107页 |
4 小结 | 第107-108页 |
第六章 H-N104C8-B氨基酸突变对其热稳定性的影响 | 第108-120页 |
1 材料和方法 | 第108-111页 |
·材料 | 第108页 |
·方法 | 第108-111页 |
2 结果 | 第111-115页 |
·HN104C8突变基因的克隆 | 第111-112页 |
·HN104C8突变基因的表达 | 第112-113页 |
·HN104C8突变酶的活力 | 第113页 |
·HN104C8突变酶的最适温度 | 第113-114页 |
·HN104C8突变酶的热稳定性 | 第114-115页 |
3 讨论 | 第115-119页 |
·HN104C8第197-202位突变对β-葡聚糖酶特性的影响 | 第115-116页 |
·H-N104C8第189-193位氨基酸突变对β-葡聚糖酶特性的影响 | 第116-118页 |
·H-N104C8第165-172位氨基酸突变对β-葡聚糖酶特性的影响 | 第118页 |
·T144E和Y124WGl28E突变对β-葡聚糖酶特性的影响 | 第118-119页 |
4 小结 | 第119-120页 |
论文小结 | 第120-121页 |
创新点 | 第121-122页 |
参考文献 | 第122-136页 |
附:发表论文 | 第136-137页 |
致谢 | 第137页 |