| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第10-18页 |
| 1 低温蛋白酶与低温微生物 | 第10页 |
| 2 低温微生物 | 第10-14页 |
| 2．1 低温微生物的分布及类群 | 第10-11页 |
| 2．2 低温微生物冷适应机制 | 第11-13页 |
| 2．2．1 调节膜脂组成 | 第12页 |
| 2．2．2 合成冷休克蛋白 | 第12页 |
| 2．2．3 独特的蛋白质结构 | 第12-13页 |
| 2．3 低温微生物的应用及前景 | 第13-14页 |
| 3 低温蛋白酶 | 第14-17页 |
| 3．1 低温蛋白酶的生理生化特征 | 第14-15页 |
| 3．2 低温酶冷适应机制 | 第15-16页 |
| 3．3 低温蛋白酶研究方法 | 第16页 |
| 3．4 低温蛋白酶的应用 | 第16-17页 |
| 4 本研究的目的及内容 | 第17-18页 |
| 第一章 产低温蛋白酶菌株的分离与鉴定 | 第18-26页 |
| 1 材料 | 第18-19页 |
| 1．1 样品及菌株分离 | 第18页 |
| 1．2 主要仪器 | 第18页 |
| 1．3 培养基 | 第18页 |
| 1．4 试剂 | 第18-19页 |
| 2． 方法 | 第19-20页 |
| 2．1 产蛋白酶菌株富集分离 | 第19页 |
| 2．2 复筛 | 第19页 |
| 2．3 蛋白酶粗酶活力测定 | 第19页 |
| 2．4 G+C mol%含量测定 | 第19页 |
| 2．5 16S rDNA的PCR扩增和测序 | 第19-20页 |
| 2．6 系统发育分析 | 第20页 |
| 2．7 常规分类鉴定 | 第20页 |
| 3． 结果与讨论 | 第20-26页 |
| 3．1 菌株筛选 | 第20页 |
| 3．1．1 初筛 | 第20页 |
| 3．1．2 菌种的复筛 | 第20页 |
| 3．2 分离菌株的鉴定 | 第20-26页 |
| 3．2．1 形态特征及培养特征 | 第20-21页 |
| 3．2．2 耐药性、耐盐度、温度、pH | 第21页 |
| 3．2．3 其他生理生化特性 | 第21-23页 |
| 3．2．4 菌株对95种碳源利用测定 | 第23-24页 |
| 3．2．5 菌株的系统发育分析 | 第24-26页 |
| 第二章 紫外线诱变菌株提高酶量的研究 | 第26-30页 |
| 1 材料与方法 | 第26-27页 |
| 1．1 培养基 | 第26页 |
| 1．2 诱变处理 | 第26-27页 |
| 1．2．1 菌悬液的制备 | 第26-27页 |
| 1．2．2 紫外诱变处理 | 第27页 |
| 1．2．3 菌株筛选 | 第27页 |
| 1．3 蛋白酶的活性测定 | 第27页 |
| 2． 结果与讨论 | 第27-30页 |
| 2．1 菌株选育 | 第27页 |
| 2．2 诱变对菌种的影响 | 第27-29页 |
| 2．3 诱变菌株的产酶稳定性测定 | 第29-30页 |
| 第三章 菌株HL221产酶条件的优化 | 第30-37页 |
| 1 材料与方法 | 第30页 |
| 1．1 培养基 | 第30页 |
| 1．2 生长量的测定 | 第30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-37页 |
| 2．1 培养条件对菌株生长和产酶的影响 | 第30-32页 |
| 2．1．1 产酶时间的优化 | 第30-31页 |
| 2．1．2 培养温度的优化 | 第31页 |
| 2．1．3 培养基pH的优化 | 第31-32页 |
| 2．1．4 接种量的优化 | 第32页 |
| 2．2 发酵培养基组成对菌株产酶的影响 | 第32-34页 |
| 2．2．1 碳源的优化 | 第32页 |
| 2．2．2 氮源的优化 | 第32-33页 |
| 2．2．3 金属离子对产酶的影响 | 第33-34页 |
| 2．3 条件优化的正交试验 | 第34页 |
| 2．4 粗酶特性 | 第34-37页 |
| 2．4．1 温度对粗酶酶活的影响 | 第34-36页 |
| 2．4．2 pH对粗酶酶活的影响 | 第36-37页 |
| 第四章 低温蛋白酶的纯化与特性研究 | 第37-45页 |
| 1 材料与方法 | 第37-38页 |
| 1．1 菌种 | 第37页 |
| 1．2 试剂和仪器 | 第37页 |
| 1．3 酶的分离纯化步骤 | 第37页 |
| 1．4 蛋白质含量的测定 | 第37页 |
| 1．5 电泳分析 | 第37-38页 |
| 1．6 凝胶电泳分析蛋白酶活性 | 第38页 |
| 2． 结果与分析 | 第38-45页 |
| 2．1 酶的提纯 | 第38-41页 |
| 2．1．1 粗酶液制备 | 第38页 |
| 2．1．2 (NH_4)_2SO_4分级沉淀 | 第38-39页 |
| 2．1．3 Sephadex G-75分子筛层析 | 第39页 |
| 2．1．4 DEAE Sepharose Fast Flow柱层析 | 第39页 |
| 2．1．5 提纯结果 | 第39-41页 |
| 2．2 酶学性质 | 第41-43页 |
| 2．2．1 蛋白酶的分子量和等电点的测定 | 第41页 |
| 2．2．2 最适温度和热稳定性 | 第41页 |
| 2．2．3 最适pH和对pH的稳定性 | 第41-42页 |
| 2．2．4 金属离子对酶活的影响 | 第42-43页 |
| 2．2．5 底物浓度对蛋白酶水解速度的影响——Km的测定 | 第43页 |
| 2．3 凝胶电泳分析蛋白酶活性 | 第43-45页 |
| 第五章 结论与展望 | 第45-47页 |
| 1 研究结论 | 第45页 |
| 2 展望 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |