| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-31页 |
| ·趋化因子及其受体 | 第12-20页 |
| ·趋化因子的分类和命名 | 第12-16页 |
| ·CXC趋化因子 | 第15页 |
| ·CC趋化因子 | 第15页 |
| ·C趋化因子 | 第15页 |
| ·CX_3C趋化因子 | 第15-16页 |
| ·趋化因子的结构 | 第16-17页 |
| ·趋化因子受体 | 第17-18页 |
| ·信号传导 | 第18-20页 |
| ·趋化因子与肿瘤 | 第20-26页 |
| ·趋化因子在免疫应答中的作用 | 第20-21页 |
| ·趋化因子在肿瘤生长和转移中的作用 | 第21-22页 |
| ·促进细胞转化和肿瘤生长 | 第21页 |
| ·调节肿瘤血管生成 | 第21-22页 |
| ·趋化因子在肿瘤转移中的作用 | 第22页 |
| ·趋化因子在抗肿瘤反应中的作用 | 第22-26页 |
| ·趋化因子的单独应用 | 第22-25页 |
| ·趋化因子与细胞因子的联合应用 | 第25-26页 |
| ·免疫细胞因子研究进展 | 第26-30页 |
| ·细胞因子在肿瘤部位的富集技术 | 第26-28页 |
| ·免疫细胞因子的构建策略 | 第28页 |
| ·免疫细胞因子的应用 | 第28-30页 |
| ·Ab-IL2 | 第28-30页 |
| ·Ab-IL12 | 第30页 |
| ·Ab-GM-CSF | 第30页 |
| ·本论文的研究目的与意义 | 第30-31页 |
| 第二章 小鼠趋化因子CXCL10基因克隆 | 第31-39页 |
| ·材料与方法 | 第32-34页 |
| ·细胞和菌株 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·小鼠CXCL10的诱导表达 | 第32页 |
| ·细胞总RNA提取 | 第32页 |
| ·反转录PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·CXCL10基因克隆 | 第33页 |
| ·序列测定 | 第33-34页 |
| ·结果 | 第34-36页 |
| ·小鼠CXCL10基因扩增 | 第34页 |
| ·小鼠CXCL10基因克隆 | 第34-36页 |
| ·小鼠CXCL10基因序列 | 第36页 |
| ·讨论 | 第36-39页 |
| 第三章 抗酸性同功铁蛋白单链抗体的构建与高效表达 | 第39-59页 |
| ·材料与方法 | 第40-46页 |
| ·菌株和质粒 | 第40页 |
| ·细胞 | 第40页 |
| ·杂交瘤细胞mRNA提取 | 第40页 |
| ·scFv噬菌体抗体库的构建 | 第40-41页 |
| ·AIF阳性重组噬菌体筛选 | 第41-42页 |
| ·AIF4c9 scFv基因序列测定 | 第42页 |
| ·AIF4c9 scFv表达质粒构建 | 第42页 |
| ·AIF4c9 scFv抗体的诱导表达 | 第42-43页 |
| ·AIF4c9 scFv表达蛋白的纯化和复性 | 第43-44页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第44-45页 |
| ·SDS-PAGE和蛋白免疫印迹 | 第45页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第45页 |
| ·AIF4c9 scFv复性蛋白的抗体特异性鉴定 | 第45-46页 |
| ·AIF4c9 scFv复性蛋白的抗体亲和力常数测定 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-57页 |
| ·scFv基因的构建 | 第46-48页 |
| ·AIF4c9 scFv基因序列分析 | 第48-50页 |
| ·AIF4c9 scFv表达质粒的构建 | 第50页 |
| ·AIF4c9 scFv抗体的高效表达 | 第50-51页 |
| ·AIF4c9 scFv表达蛋白的纯化和复性 | 第51-54页 |
| ·AIF4c9 scFv重组抗体的表达量 | 第54-55页 |
| ·AIF4c9 scFv复性蛋白的抗体特异性 | 第55页 |
| ·AIF4c9 scFv复性蛋白的抗体亲和力常数 | 第55-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 免疫细胞因子IP10-scFv的构建及其抗肿瘤特性研究 | 第59-90页 |
| ·材料与方法 | 第60-69页 |
| ·质粒和菌株 | 第60页 |
| ·细胞 | 第60页 |
| ·实验动物 | 第60页 |
| ·IP10-scFv表达质粒的构建 | 第60-63页 |
| ·重组质粒pc3IP10的构建 | 第62页 |
| ·表达质粒pc3IP104c9的构建 | 第62-63页 |
| ·细胞转染 | 第63-64页 |
| ·G418工作浓度测定 | 第63页 |
| ·细胞转染 | 第63-64页 |
| ·AIF阳性克隆筛选和克隆化 | 第64-65页 |
| ·间接ELISA检测 | 第64页 |
| ·有限稀释法克隆化 | 第64-65页 |
| ·IP10-scFv表达蛋白的纯化 | 第65页 |
| ·IP10-scFv腹水诱生 | 第65页 |
| ·IP10-scFv表达蛋白的纯化 | 第65页 |
| ·免疫细胞因子IP10-scFv的抗体亲和力常数测定 | 第65-66页 |
| ·AIF抗原结合试验 | 第66页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第66页 |
| ·间接免疫荧光 | 第66页 |
| ·CXCR3受体结合试验 | 第66-67页 |
| ·小鼠淋巴细胞的激活和分离 | 第66-67页 |
| ·小鼠T淋巴细胞的纯化 | 第67页 |
| ·FCM分析 | 第67页 |
| ·小鼠T淋巴细胞体外趋化试验 | 第67-68页 |
| ·IP10-scFv融合蛋白趋化试验 | 第67-68页 |
| ·结合IP10-scFv融合蛋白的肿瘤细胞趋化试验 | 第68页 |
| ·免疫细胞因子IP10-scFv体内肿瘤抑制试验 | 第68-69页 |
| ·H22小鼠肝癌细胞AIF的鉴定 | 第68页 |
| ·小鼠体内肿瘤抑制试验 | 第68页 |
| ·病理学检查 | 第68-69页 |
| ·结果 | 第69-84页 |
| ·IP10-scFv表达质粒的构建 | 第69-72页 |
| ·重组质粒pc3IP10的构建 | 第69-72页 |
| ·表达质粒pc3IP104c9的构建 | 第72页 |
| ·IP10-scFv融合蛋白的表达和纯化 | 第72-73页 |
| ·免疫细胞因子IP10-scFv的抗体亲和力常数 | 第73-75页 |
| ·IP10-scFv融合蛋白特异识别肝癌细胞 | 第75-78页 |
| ·人肝癌细胞SMMC 7721 | 第75-77页 |
| ·小鼠肝癌细胞H22 | 第77-78页 |
| ·IP10-scFv融合蛋白与CXCR3受体特异结合 | 第78页 |
| ·免疫细胞因子IP10-scFv的体外趋化特性 | 第78-81页 |
| ·免疫细胞因子IP10-scFv的体内抑瘤效应 | 第81-84页 |
| ·IP10-scFv融合蛋白抑制H22肿瘤生长 | 第81-83页 |
| ·H22肿瘤的病理学检查 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-90页 |
| ·免疫细胞因子IP10-scFv的构建 | 第84-85页 |
| ·IP10-scFv融合蛋白的表达和纯化 | 第85-87页 |
| ·免疫细胞因子IP10-scFv的双重活性 | 第87-88页 |
| ·小鼠肝癌肿瘤模型的建立 | 第88页 |
| ·免疫细胞因子IP10-scFv的抗肿瘤特性 | 第88-90页 |
| 第五章 免疫细胞因子IP10-scFv的高效表达与复性 | 第90-100页 |
| ·材料与方法 | 第90-92页 |
| ·菌株和质粒 | 第90页 |
| ·IP10-scFv表达质粒的构建 | 第90-91页 |
| ·IP10-scFv融合蛋白的诱导表达 | 第91-92页 |
| ·IP10-scFv表达蛋白的纯化和复性 | 第92页 |
| ·IP10-scFv复性蛋白的抗体亲和力常数测定 | 第92页 |
| ·AIF抗原结合试验 | 第92页 |
| ·小鼠T淋巴细胞趋化试验 | 第92页 |
| ·结果 | 第92-99页 |
| ·IP10-scFv表达质粒的构建 | 第92-93页 |
| ·IP10-scFv融合蛋白的高效表达 | 第93-94页 |
| ·IP10-scFv表达蛋白的纯化和复性 | 第94-95页 |
| ·IP10-scFv融合蛋白的表达量 | 第95页 |
| ·IP10-scFv复性蛋白的抗体亲和力常数 | 第95-97页 |
| ·IP10-scFv复性蛋白与肝癌细胞特异结合 | 第97-98页 |
| ·IP10-scFv复性蛋白的体外趋化特性 | 第98-99页 |
| ·讨论 | 第99-100页 |
| 研究总结 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-119页 |
| 附录Ⅰ DNA测序彩图 | 第119-122页 |
| 附录Ⅱ 在读期间发表的文章 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
