| 中文摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-18页 |
| 第一章 快生小菌的分离鉴定及山梨糖脱氢酶的表达 | 第18-30页 |
| 材料与方法 | 第18-22页 |
| 1 材料 | 第18-20页 |
| ·菌株和质粒 | 第18页 |
| ·引物 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18-19页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·主要溶液 | 第19-20页 |
| 2 方法 | 第20-22页 |
| ·山梨糖及KGA的薄层层析分析 | 第20页 |
| ·透射电镜观察菌体形态 | 第20页 |
| ·抗生素敏感实验 | 第20页 |
| ·裂解液制备 | 第20-21页 |
| ·SDS-PAGE分析全菌蛋白 | 第21页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第21页 |
| ·16S rDNA的扩增 | 第21-22页 |
| ·DNA测序及序列分析 | 第22页 |
| ·pWH1266-sdh载体的构建 | 第22页 |
| ·pWH1266-sdh的接合反应 | 第22页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺电泳活性染色 | 第22页 |
| 结果 | 第22-29页 |
| 1 快生产酸菌分离 | 第22-23页 |
| 2 产酸快生小菌形态 | 第23-24页 |
| 3 小菌、Y18A,Y18B抗生素敏感性检测 | 第24页 |
| 4 Y18A、Y18B和小菌全菌蛋白的比较 | 第24-25页 |
| 5 Y18A、Y18B和小菌山梨糖脱氢酶检测 | 第25-26页 |
| 6 Y18A、Y18B和小菌16S rDNA扩增序和列分析 | 第26-27页 |
| 7 利用pWH1266质粒在快生小菌中表达山梨糖脱氢酶 | 第27-29页 |
| ·pWH1266-sdh表达载体的构建 | 第27页 |
| ·pWH1266-sdh/DH5a山梨糖脱氢酶活性检测 | 第27-28页 |
| ·pWH1266-sdh接合转移至乙酸钙不动杆菌Y2004 | 第28页 |
| ·pWH1266-sdh/Y2004山梨糖脱氢酶活性检测 | 第28-29页 |
| 讨论 | 第29-30页 |
| 第二章 山梨糖脱氢酶相互作用蛋白的初步研究 | 第30-41页 |
| 材料与方法 | 第30-34页 |
| 1 材料 | 第30-32页 |
| ·菌株和质粒 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30-31页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要溶液 | 第31-32页 |
| 2 方法 | 第32-34页 |
| ·GST融合蛋白的纯化 | 第32页 |
| ·His标签融合蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| ·GST pull-down实验 | 第33页 |
| ·快速银染 | 第33-34页 |
| 结果 | 第34-40页 |
| 1 GST-SDH与cytc-His体外相互作用的实验 | 第34-37页 |
| ·pET-cytc载体的构建 | 第34-35页 |
| ·Cytc-His的表达和纯化 | 第35页 |
| ·pGEX-KG-sdh的构建 | 第35-36页 |
| ·GST-SDH的表达和纯化 | 第36页 |
| ·GST-SDH与Cytc-His体外的相互作用 | 第36-37页 |
| 2 HIS PULL-DOWN钓取小菌中与SDH相互作用蛋白 | 第37-40页 |
| ·Chelating Sepharose-SDH珠粒的制备 | 第37-38页 |
| ·SDH-His Pull-down钓取小菌中与SDH相互作用蛋白 | 第38页 |
| ·GST-SDH Pull-down钓取小菌中与SDH相互作用蛋白 | 第38-40页 |
| 讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 小菌生长因子的研究 | 第41-55页 |
| 材料与方法 | 第41-48页 |
| 1 材料 | 第41-43页 |
| ·菌株和质粒 | 第41页 |
| ·培养基 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41-42页 |
| ·仪器和耗材 | 第42页 |
| ·主要溶液 | 第42-43页 |
| 2 方法 | 第43-48页 |
| ·混合碱基对小菌生长的影响 | 第43页 |
| ·叶酸,二氢叶酸对小菌生长的影响 | 第43页 |
| ·大菌胞内液对小菌生长的影响 | 第43-44页 |
| ·DEAE-Sepharose Fast Flow树脂柱纯化大菌破菌液 | 第44页 |
| ·电洗脱仪洗脱蛋白成分 | 第44-45页 |
| ·蛋白质等电聚焦分析 | 第45-48页 |
| 结果 | 第48-54页 |
| 1 混合碱基对小菌生长的影响 | 第48页 |
| 2 叶酸和二氢叶酸对小菌生长的影响 | 第48-49页 |
| 3 大菌胞内组分对小菌生长的影响 | 第49-54页 |
| ·大菌生长曲线 | 第49页 |
| ·大菌胞内液对小菌生长的影响 | 第49-50页 |
| ·活性蛋白的初步纯化 | 第50-52页 |
| ·DEAE活性组分Native PAGE | 第52页 |
| ·Native PAGE组分电洗脱 | 第52-53页 |
| ·活性组份等电聚焦分析 | 第53-54页 |
| 讨论 | 第54-55页 |
| 总结 | 第55-56页 |
| 发表文章 | 第56-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 英文缩略词表 | 第67页 |
