保加利亚乳杆菌代谢途径中关键基因的克隆与序列分析
| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-23页 |
| ·益生乳酸菌及保加利亚乳杆菌 | 第9-10页 |
| ·益生菌 | 第9页 |
| ·乳酸菌 | 第9-10页 |
| ·保加利亚乳杆菌 | 第10页 |
| ·乳酸细菌的基因组学研究 | 第10-13页 |
| ·乳酸细菌功能基因组学 | 第10-12页 |
| ·乳酸细菌基因可变性 | 第12-13页 |
| ·乳酸产生菌的菌株改良 | 第13-14页 |
| ·传统的菌株改良方法 | 第13页 |
| ·基因工程菌的构建及应用 | 第13-14页 |
| ·乳酸细菌的分子载体 | 第14-15页 |
| ·质粒型克隆载体 | 第14页 |
| ·质粒型整合载体 | 第14-15页 |
| ·生物信息学 | 第15-16页 |
| ·核酸与蛋白质结构和功能的预测分析 | 第16-22页 |
| ·针对核酸序列的预测方法 | 第16-19页 |
| ·针对蛋白质的预测方法 | 第19-22页 |
| ·本文的研究意义和主要研究内容 | 第22-23页 |
| 第二章 糖代谢途径分析及ack 基因克隆 | 第23-42页 |
| ·材料和方法 | 第23-30页 |
| ·菌种、培养基 | 第23页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第23-25页 |
| ·菌种活化 | 第25页 |
| ·菌种的保藏 | 第25页 |
| ·种子的获得及发酵方法 | 第25页 |
| ·生物量的测定 | 第25-26页 |
| ·保加利亚乳杆菌生长曲线的测定 | 第26页 |
| ·发酵液的处理 | 第26页 |
| ·底物的测定 | 第26-27页 |
| ·乳酸、乙酸的测定 | 第27页 |
| ·保加利亚乳杆菌基因组DNA 提取 | 第27-28页 |
| ·引物设计 | 第28页 |
| ·乙酸激酶ack 基因的PCR 扩增 | 第28页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第28页 |
| ·ack 基因的琼脂糖凝胶DNA 回收 | 第28-29页 |
| ·T 载体连接反应 | 第29页 |
| ·转化反应与蓝白筛选 | 第29-30页 |
| ·质粒提取方法 | 第30页 |
| ·酶切验证 | 第30页 |
| ·ack 基因序列测定 | 第30页 |
| ·对乙酸激酶ack 基因进行分析 | 第30页 |
| ·结果分析与讨论 | 第30-41页 |
| ·保加利亚乳杆菌的生长曲线 | 第31页 |
| ·保加利亚乳杆菌糖代谢途径分析结果 | 第31-33页 |
| ·保加利亚乳杆菌总基因组的电泳结果 | 第33页 |
| ·保加利亚乳杆菌乙酸激酶ack 基因的克隆 | 第33-35页 |
| ·ack 基因的琼脂糖凝胶DNA 回收 | 第35页 |
| ·酶切验证 | 第35页 |
| ·乙酸激酶基因ack 的序列分析 | 第35-37页 |
| ·Ack 的氨基酸分析 | 第37-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| 第三章 保加利亚乳杆菌ldhD 克隆和序列分析 | 第42-52页 |
| ·材料和方法 | 第42-43页 |
| ·菌种、培养基、菌种培养 | 第42页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第42页 |
| ·引物设计 | 第42页 |
| ·D-乳酸脱氢酶ldhD 的PCR 扩增 | 第42页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第42页 |
| ·TA 克隆及酶切反应 | 第42-43页 |
| ·D-乳酸脱氢酶ldhD 基因序列测定 | 第43页 |
| ·对D-乳酸脱氢酶ldhD 基因进行功能分析 | 第43页 |
| ·结果分析与讨论 | 第43-52页 |
| ·保加利亚乳杆菌总基因组的电泳结果 | 第43页 |
| ·D-乳酸脱氢酶ldhD 基因的克隆 | 第43-44页 |
| ·酶切验证 | 第44-45页 |
| ·D-乳酸脱氢酶ldhD 的基因序列分析 | 第45-46页 |
| ·氨基酸分析 | 第46-47页 |
| ·LdhD 的氨基酸序列比对 | 第47-49页 |
| ·蛋白质理化性质分析 | 第49页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第49-52页 |
| 第四章 保加利亚乳杆菌ldhL 基因的序列分析 | 第52-61页 |
| ·材料和方法 | 第52-53页 |
| ·菌种、培养基、菌种培养 | 第52页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第52页 |
| ·引物设计 | 第52页 |
| ·L-乳酸脱氢酶ldhL 的PCR 扩增 | 第52页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第52-53页 |
| ·L-乳酸脱氢酶ldhL 基因序列测定 | 第53页 |
| ·对L-乳酸脱氢酶ldhL 基因进行功能分析 | 第53页 |
| ·结果分析与讨论 | 第53-60页 |
| ·L-乳酸脱氢酶基因的克隆 | 第53-54页 |
| ·L-乳酸脱氢酶ldhL 的序列分析 | 第54-56页 |
| ·氨基酸分析 | 第56页 |
| ·蛋白质理化性质分析 | 第56-57页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第57-58页 |
| ·Ldh 的氨基酸序列比对 | 第58-60页 |
| ·小结 | 第60-61页 |
| 第五章 结论与展望 | 第61-63页 |
| ·主要结论 | 第61-62页 |
| ·展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
