| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略词对照表 | 第13-14页 |
| 前言 | 第14-34页 |
| 1 染色体制片技术 | 第15-17页 |
| ·材料的预处理 | 第15-16页 |
| ·染色体制片方法 | 第16-17页 |
| ·染色方法的选择 | 第17页 |
| 2 单染色体显微分离 | 第17-20页 |
| ·目标染色体识别 | 第17-18页 |
| ·染色体微分离和微切割 | 第18-20页 |
| ·微细玻璃针法 | 第18-19页 |
| ·激光显微切割法 | 第19页 |
| ·流式细胞仪分类法 | 第19-20页 |
| 3 单染色体微克隆技术及其在植物上的研究进展 | 第20-22页 |
| 4 植物染色体微分离、微切割和微扩增技术的的应用及发展 | 第22-25页 |
| ·特定染色体或染色体区段的DNA文库构建 | 第22页 |
| ·构建高密度分子标记连锁图谱和分离重要基因 | 第22-23页 |
| ·基因组物理作图 | 第23-24页 |
| ·染色体进化研究 | 第24页 |
| ·单染色体微分离、微克隆技术在柚类植物上的应用 | 第24-25页 |
| 5 AFLP分子标记技术及其在柚类植物上的应用 | 第25-28页 |
| ·AFLP分子标记技术特点 | 第25-26页 |
| ·近两年AFLP技术在植物研究中的应用 | 第26-28页 |
| ·遗传图谱构建 | 第26页 |
| ·遗传多样性和种质亲缘关系鉴定 | 第26-27页 |
| ·QTLs定位 | 第27页 |
| ·AFLP在柚类果树上的应用 | 第27-28页 |
| 6 单染色体微分离、微切割和微扩增过程中核外污染的防控 | 第28-29页 |
| 7 单染色体微克隆及其文库的鉴定 | 第29-30页 |
| 8 试验内容 | 第30页 |
| 9 实验手段 | 第30-31页 |
| 10 关键技术 | 第31-32页 |
| 11 技术路线 | 第32-33页 |
| 12 本试验的特色与创新之处 | 第33-34页 |
| 第一章 柚染色体制片和显微分离 | 第34-43页 |
| 1. 试验材料和试剂 | 第34-35页 |
| ·材料 | 第34页 |
| ·试剂 | 第34-35页 |
| 2 试验方法 | 第35-36页 |
| 3 结果和分析 | 第36-40页 |
| ·染色体制片 | 第36-39页 |
| ·单染色体的显微分离 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| ·预处理和固定 | 第40页 |
| ·前低渗 | 第40页 |
| ·酶解去壁 | 第40-41页 |
| ·后低渗 | 第41页 |
| ·压片-液氮速冻揭片法和悬液法 | 第41页 |
| ·染色 | 第41页 |
| ·显微分离 | 第41-43页 |
| 第二章 柚(Citrus grandis Osbeck)单染色体LA-PCR-AFLP技术体系中外源污染的防控 | 第43-53页 |
| 1. 试验材料和方法 | 第43-46页 |
| ·材料和试剂 | 第43-44页 |
| ·试验方法 | 第44-46页 |
| 2. 结果和分析 | 第46-51页 |
| ·8种不同试验用水的比较分析 | 第46-47页 |
| ·Bioteke水(OW水)重复性分析 | 第47页 |
| ·Southern印迹杂交验证BT水外源DNA污染程度 | 第47-48页 |
| ·Bioteke水(OW水)用于柚单染色体LA-PCR-AFLP分析 | 第48-49页 |
| ·单染色体微克隆过程中不同步骤对水污染的敏感性分析 | 第49-50页 |
| ·LA-PCR多聚物分析 | 第50页 |
| ·细胞质污染对柚单染色体LA-PCR的影响 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 第三章 柚(Citrus grandis Osbeck)单染色体LA-PCR-AFLP技术体系的建立 | 第53-80页 |
| 1 试验材料和试剂 | 第53-54页 |
| 2 试验方法 | 第54-60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-77页 |
| ·柚基因组DNA的提取 | 第60-61页 |
| ·柚单染色体微分离和LA-PCR预扩增 | 第61-65页 |
| ·LA-PCR反应中几个问题的研究 | 第64-65页 |
| ·柚不同单染色体微分离和微克隆产物的dot blot杂交验证 | 第65-66页 |
| ·柚不同单染色体微分离和微克隆产物的Southern blot杂交验证 | 第66-67页 |
| ·选择性扩增体系优化 | 第67-70页 |
| ·反应程序优化 | 第67-68页 |
| ·模板浓度梯度分析 | 第68-69页 |
| ·引物筛选 | 第69-70页 |
| ·不同型号PCR仪对反应结果的影响 | 第70页 |
| ·柚单染色体AFLP-SDS-PAGE图谱的建立 | 第70-77页 |
| ·柚各单染色体差异片段的分析 | 第77页 |
| 4 讨论 | 第77-80页 |
| 第四章 柚cDNA扩增文库的建立 | 第80-92页 |
| 1 试验材料和试剂 | 第80-81页 |
| 2 试验方法 | 第81-86页 |
| 3 结果与分析 | 第86-89页 |
| ·柚总RNA的提取 | 第86-87页 |
| ·cDNA双链的合成及扩增 | 第87页 |
| ·cDNA扩增文库的建立 | 第87-89页 |
| 4 讨论 | 第89-92页 |
| ·琯溪蜜柚总RNA的提取 | 第89-90页 |
| ·如何提高连接转化效率 | 第90页 |
| ·cDNA文库片段的菌液PCR | 第90-92页 |
| 第五章 柚单染色体文库dot blot杂交体系的建立 | 第92-103页 |
| 1 试剂和材料 | 第92-93页 |
| 2 试验方法 | 第93-96页 |
| 3 结果和分析 | 第96-102页 |
| ·探针制备中DIG-High Prime(vial 1)用量的优化 | 第96-97页 |
| ·探针的纯化 | 第97-98页 |
| ·第一轮与第二轮扩增产物制备探针的比较 | 第98-99页 |
| ·杂交模板的纯化 | 第99-100页 |
| ·单染色体探针对外源DNA污染检测的灵敏度 | 第100-102页 |
| 4 讨论 | 第102-103页 |
| 第六章 柚单染色体文库的建立 | 第103-124页 |
| 1. 试剂和材料 | 第103页 |
| 2 试验方法 | 第103-104页 |
| 3 结果和分析 | 第104-122页 |
| ·55条单染色体的聚类分析 | 第104-114页 |
| ·不同类别单染色体对cDNA克隆片段的dot blot杂交 | 第114-121页 |
| ·同源单染色体划分的进一步验证 | 第121-122页 |
| 4 讨论 | 第122-124页 |
| 小结 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-137页 |
| 致谢 | 第137页 |
