| 缩写词 | 第1-13页 |
| 摘要 | 第13-16页 |
| Abstract | 第16-20页 |
| 第一章 前言 | 第20-42页 |
| 1 植物抗寒分子生物学研究进展 | 第20-23页 |
| ·植物抗寒相关基因 | 第20-22页 |
| ·冷诱导基因 | 第21页 |
| ·膜稳定性相关基因 | 第21页 |
| ·LEA蛋白基因 | 第21-22页 |
| ·植物抗寒的分子机制 | 第22-23页 |
| ·转录水平的调控 | 第22-23页 |
| ·转录后水平的调控 | 第23页 |
| 2 抗冻蛋白研究进展 | 第23-34页 |
| ·抗冻蛋白的特性 | 第23-24页 |
| ·抗冻蛋白的作用机制 | 第24页 |
| ·抗冻蛋白的应用 | 第24-25页 |
| ·抗冻蛋白在农业上的应用 | 第24-25页 |
| ·AFPs在医学研究中的应用 | 第25页 |
| ·AFPs在食品加工上的应用 | 第25页 |
| ·AFPs在工业上的应用 | 第25页 |
| ·鱼类抗冻蛋白 | 第25-27页 |
| ·昆虫抗冻蛋白 | 第27-28页 |
| ·细菌抗冻蛋白 | 第28-29页 |
| ·植物抗冻蛋白 | 第29-34页 |
| ·植物AFPs的分离及特性 | 第29-32页 |
| ·抗冻蛋白转化植物研究进展 | 第32-34页 |
| 3 香蕉生物技术研究进展 | 第34-40页 |
| ·香蕉细胞工程研究进展 | 第35-36页 |
| ·香蕉悬浮细胞培养 | 第35-36页 |
| ·香蕉原生质体培养 | 第36页 |
| ·香蕉基因工程研究进展 | 第36-40页 |
| ·香蕉有益基因的克隆 | 第36-39页 |
| ·与果实成熟有关的基因 | 第36-38页 |
| ·香蕉抗病相关基因的克隆 | 第38页 |
| ·香蕉抗寒相关基因的克隆 | 第38页 |
| ·其他有益功能基因的克隆 | 第38-39页 |
| ·香蕉的遗传转化 | 第39-40页 |
| 4 本研究的意义及主要内容 | 第40-42页 |
| ·意义 | 第40-41页 |
| ·主要内容 | 第41-42页 |
| 第二章 野生香蕉低温胁迫下几丁质酶基因的cDNA全长克隆及生物信息学分析 | 第42-80页 |
| 第一节 三明野生香蕉低温胁迫下几丁质酶基因克隆 | 第42-56页 |
| 1 材料与方法 | 第43-46页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-46页 |
| ·三明野生香蕉叶片总RNA的提取方法和浓度检测 | 第43-44页 |
| ·三明野生香蕉叶片几丁质酶基因cDNA保守区的克隆 | 第44页 |
| ·三明野生香蕉几丁质酶基因3’端序列克隆 | 第44-45页 |
| ·三明野生香蕉几丁质酶基因5’端序列克隆 | 第45页 |
| ·三明野生香蕉叶片几丁质酶基因全长开放阅读框(ORF)的克隆 | 第45页 |
| ·PCR产物回收与测序 | 第45页 |
| ·序列拼接 | 第45-46页 |
| ·全长序列分析 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-54页 |
| ·三明野生香蕉叶片总RNA提取纯度与浓度检测 | 第46页 |
| ·三明野生香蕉几丁质酶基因cDNA全长序列的获得 | 第46-49页 |
| ·三明野生香蕉叶片几丁质酶基因测序结果与序列分析 | 第49-53页 |
| ·三明野生香蕉ChⅠ2基因与冬黑麦几丁质酶抗冻蛋白基因的比较分析 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| ·野生香蕉叶片总RNA提取方法的探讨 | 第54-55页 |
| ·三明野生香蕉ChⅠ2基因可能是几丁质酶抗冻蛋白基因 | 第55页 |
| ·3'UTR与基因的抗冻活性 | 第55页 |
| ·三明野生香蕉几丁质酶抗冻蛋白基因的克隆在香蕉抗寒育种中的意义 | 第55-56页 |
| 第二节 三明野生香蕉低温胁迫下几丁质酶基因的生物信息学分析 | 第56-80页 |
| 1 材料与方法 | 第56-57页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-57页 |
| ·蛋白质基本理化性质预测 | 第56页 |
| ·蛋白的亲疏水特性预测 | 第56页 |
| ·与同源蛋白质家族比较 | 第56页 |
| ·信号肽的预测 | 第56页 |
| ·亚细胞定位预测 | 第56页 |
| ·蛋白的跨膜结构预测 | 第56页 |
| ·蛋白卷曲螺旋结构的预测 | 第56页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第56页 |
| ·磷酸化位点预测 | 第56页 |
| ·保守结构域与功能域预测 | 第56-57页 |
| ·其他功能点预测 | 第57页 |
| ·三维结构的预测 | 第57页 |
| ·氨基酸序列的分子系统进化预测 | 第57页 |
| ·基因功能的预测 | 第57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-78页 |
| ·蛋白质的基本理化性质 | 第57-60页 |
| ·亲疏水特性预测与分析 | 第60-61页 |
| ·与同源蛋白质家族比较分析 | 第61-63页 |
| ·信号肽的预测和分析 | 第63页 |
| ·亚细胞定位预测与分析 | 第63-64页 |
| ·蛋白的跨膜结构预测与分析 | 第64-65页 |
| ·蛋白卷曲螺旋结构预测与分析 | 第65-66页 |
| ·蛋白的二级结构预测 | 第66-68页 |
| ·磷酸化位点预测与分析 | 第68-70页 |
| ·保守结构域与功能域分析 | 第70-71页 |
| ·其他功能点预测和分析 | 第71-74页 |
| ·三维结构预测与分析 | 第74-75页 |
| ·氨基酸序列的分子系统进化预测与分析 | 第75-77页 |
| ·基因功能的预测与分析 | 第77-78页 |
| 3 讨论 | 第78-80页 |
| ·几丁质酶基因的多样性 | 第78-79页 |
| ·三明野生香蕉ChiⅠ2蛋白是几丁质酶在低温下的功能类似蛋白 | 第79页 |
| ·几丁质酶基因的二级结构与抗冻蛋白功能 | 第79-80页 |
| 第三章 三明野生香蕉ChiⅠ1与ChiⅠ2基因DNA克隆及内含子分析 | 第80-90页 |
| 1 材料与方法 | 第80-81页 |
| ·材料 | 第80页 |
| ·主要试剂 | 第80页 |
| ·方法 | 第80-81页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第80页 |
| ·基因组DNA的检测 | 第80页 |
| ·三明野生香蕉叶片ChiⅠ1、ChiⅠ2基因DNA序列的(ORF)PCR扩增 | 第80-81页 |
| 2 结果与分析 | 第81-88页 |
| ·三明野生香蕉叶片基因组DNA的提取 | 第81页 |
| ·三明野生香蕉叶片基因组DNA ChiⅠ1与ChiⅠ2基因的克隆 | 第81-82页 |
| ·三明野生香蕉叶片ChiⅠ1与ChiⅠ2基因的内含子分析 | 第82-88页 |
| 3 讨论 | 第88-90页 |
| ·几丁质酶基因内含子的功能 | 第88-89页 |
| ·几丁质酶抗冻蛋白基因DNA序列获得的意义 | 第89-90页 |
| 第四章 三明野生香蕉ChiⅠ1与ChiⅠ2基因启动子的克隆及功能预测 | 第90-102页 |
| 1. 材料与方法 | 第90-92页 |
| ·材料 | 第90页 |
| ·主要试剂 | 第90页 |
| ·方法 | 第90-92页 |
| ·三明野生香蕉叶片基因组DNA的提取 | 第90页 |
| ·交错式热不对称PCR染色体步移 | 第90-92页 |
| ·产物回收与测序 | 第92页 |
| ·序列分析 | 第92页 |
| 2 结果与分析 | 第92-100页 |
| ·启动子PCR扩增 | 第92页 |
| ·三明野生香蕉ChiⅠ1与ChiⅠ2基因启动子PCR扩增产物的克隆与测序 | 第92-94页 |
| ·启动子的调控元件预测 | 第94-100页 |
| ·三明野生香蕉ChiⅠ1基因启动子的调控元件预测 | 第94-95页 |
| ·三明野生香蕉ChiⅠ2基因启动子的调控元件预测 | 第95-100页 |
| 3 讨论 | 第100-102页 |
| ·启动子序列中的调控元件在基因表达调控中的作用 | 第100-101页 |
| ·几丁质酶抗冻蛋白基因启动子获得的意义 | 第101-102页 |
| 第五章 三明野生香蕉低温胁迫下几丁质酶基因的表达分析 | 第102-115页 |
| 第一节 三明野生香蕉低温胁迫下几丁质酶基因的荧光定量PCR分析 | 第102-110页 |
| 1 材料与方法 | 第103-104页 |
| ·材料 | 第103页 |
| ·试剂与仪器 | 第103页 |
| ·方法 | 第103-104页 |
| ·三明野生香蕉总RNA提取以及纯度、完整性鉴定 | 第103页 |
| ·cDNA合成 | 第103页 |
| ·引物设计 | 第103-104页 |
| ·实时荧光定量PCR条件优化和实时定量分析 | 第104页 |
| 2 结果与分析 | 第104-109页 |
| ·实时荧光定量PCR扩增参照基因和几丁质酶基因的参数分析 | 第104-108页 |
| ·三明野生香蕉叶片不同处理条件ChiⅠ1与ChiⅠ2基因的相对定量表达分析 | 第108-109页 |
| 3 讨论 | 第109-110页 |
| ·实时荧光定量PCR技术与其他基因表达差异方法的比较 | 第109页 |
| ·不同低温处理条件下的三明野生香蕉几丁质酶基因的实时表达 | 第109-110页 |
| 第二节 三明野生香蕉低温胁迫下几丁质酶活性的测定及变化规律探讨 | 第110-115页 |
| 1 材料与方法 | 第110-112页 |
| ·材料 | 第110页 |
| ·方法 | 第110-112页 |
| ·胶体几丁质的制备 | 第110页 |
| ·酶液的提取 | 第110-111页 |
| ·标准N-乙酰氨基葡萄糖的测定及标准曲线的制作 | 第111页 |
| ·三明野生香蕉几丁质外切酶活性测定 | 第111页 |
| ·三明野生香蕉几丁质内切酶活性测定 | 第111-112页 |
| 2 结果与分析 | 第112-114页 |
| ·N-乙酰氨基葡萄糖标准曲线 | 第112页 |
| ·三明野生香蕉外切几丁质酶活性的变化规律 | 第112-113页 |
| ·三明野生香蕉内切几丁质酶活性的变化规律 | 第113-114页 |
| 3 讨论 | 第114-115页 |
| 第六章 三明野生香蕉低温胁迫下β-1,3-葡聚糖酶基因的cDNA全长克隆及生物信息学分析 | 第115-144页 |
| 第一节 三明野生香蕉低温胁迫下β-1,3-葡聚糖酶基因克隆 | 第115-123页 |
| 1 材料与方法 | 第116页 |
| ·材料 | 第116页 |
| ·方法 | 第116页 |
| ·三明野生香蕉低温胁迫下β-1,3-葡聚糖酶基因cDNA保守区的克隆 | 第116页 |
| ·三明野生香蕉低温胁迫下β-1,3-葡聚糖酶基因cDNA开放阅读框(ORF)的克隆 | 第116页 |
| ·PCR产物回收与测序 | 第116页 |
| 2 结果与分析 | 第116-122页 |
| ·三明野生香蕉低温胁迫下β-1,3-葡聚糖酶基因cDNA全长序列的获得 | 第116-118页 |
| ·三明野生香蕉低温胁迫下β-1,3-葡聚糖酶基因测序结果与序列分析 | 第118-121页 |
| ·三明野生香蕉低温胁迫下β-1,3-葡聚糖酶基因序列分析 | 第121-122页 |
| ·核苷酸序列同源性比较分析 | 第121页 |
| ·氨基酸序列比较分析 | 第121-122页 |
| 3 讨论 | 第122-123页 |
| ·三明野生香蕉gsp基因可能是抗冻蛋白基因 | 第122-123页 |
| ·β-1,3-葡聚糖酶基因在香蕉育种中的作用 | 第123页 |
| 第二节 三明野生香蕉低温胁迫下β-1,3-葡聚糖酶基因生物信息学分析 | 第123-144页 |
| 1 材料与方法 | 第123-124页 |
| ·材料 | 第123页 |
| ·方法 | 第123-124页 |
| 2 结果与分析 | 第124-142页 |
| ·蛋白质基本理化性质 | 第124-126页 |
| ·亲疏水特性预测与分析 | 第126-127页 |
| ·与同源蛋白质家族比较分析 | 第127-129页 |
| ·信号肽的预测和分析 | 第129页 |
| ·亚细胞定位预测与分析 | 第129-130页 |
| ·蛋白的跨膜结构预测与分析 | 第130-132页 |
| ·蛋白卷曲螺旋结构预测与分析 | 第132-133页 |
| ·蛋白二级结构的预测与分析 | 第133-135页 |
| ·磷酸化位点预测与分析 | 第135-136页 |
| ·其他功能点预测和分析 | 第136-138页 |
| ·三维结构预测与分析 | 第138-139页 |
| ·氨基酸序列的分子系统进化预测与分析 | 第139-141页 |
| ·基因功能的预测与分析 | 第141-142页 |
| 3 讨论 | 第142-144页 |
| ·三明野生香蕉β-1,3-葡聚糖酶基因的结构特点 | 第142-143页 |
| ·三明野生香蕉gsp基因可能是β-1,3-葡聚糖酶抗冻蛋白基因 | 第143-144页 |
| 第七章 三明野生香蕉gsp及gsp1基因DNA克隆及内含子分析 | 第144-153页 |
| 1 材料与方法 | 第144页 |
| ·材料 | 第144页 |
| ·方法 | 第144页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第144页 |
| ·主要试剂 | 第144页 |
| ·三明野生香蕉叶片gsp和gsp1基因DNA序列(ORF)的PCR扩增 | 第144页 |
| 2 结果与分析 | 第144-152页 |
| ·三明野生香蕉叶片gsp和gsp1基因DNA序列的克隆 | 第144-145页 |
| ·三明野生香蕉叶片gsp和gsp1基因的内含子分析 | 第145-152页 |
| 3 讨论 | 第152-153页 |
| ·三明野生香蕉β-1,3-葡聚糖酶基因内含子的特殊性 | 第152页 |
| ·三明野生香蕉β-1,3-葡聚糖酶基因内含子克隆的重要意义 | 第152-153页 |
| 第八章 三明野生香蕉低温胁迫下β-1,3-葡聚糖酶基因的表达分析 | 第153-160页 |
| 1 材料与方法 | 第153-160页 |
| ·材料 | 第153页 |
| ·试剂与仪器 | 第153页 |
| ·方法 | 第153-154页 |
| ·总RNA提取以及纯度、完整性鉴定 | 第153页 |
| ·cDNA合成 | 第153页 |
| ·引物设计 | 第153-154页 |
| ·实时荧光定量PCR条件优化和实时定量分析 | 第154页 |
| 2 结果与分析 | 第154-159页 |
| ·实时荧光定量PCR扩增参照基因和β-1,3-葡聚糖酶基因的参数分析 | 第154-158页 |
| ·三明野生香蕉叶片不同处理条件β-1,3-葡聚糖酶基因的相对定量表达分析 | 第158-159页 |
| 3 讨论 | 第159-160页 |
| ·不同低温处理下三明野生香蕉β-1,3-葡聚糖酶基因的表达特点 | 第159页 |
| ·三明野生香蕉gsp基因与ChiⅠ2基因可能都是抗冻蛋白基因 | 第159-160页 |
| 第九章 小结 | 第160-165页 |
| 1 三明野生香蕉叶片ChiⅠ1基因、ChiⅠ2基因cDNA全长的获得及生物信息学分析 | 第160页 |
| 2 三明野生香蕉ChiⅠ1与ChiⅠ2基因DNA序列的克隆 | 第160-161页 |
| 3 三明野生香蕉ChiⅠ1与ChiⅠ2基因启动子的克隆 | 第161页 |
| 4 三明野生香蕉低温胁迫下几丁质酶基因的表达分析 | 第161-163页 |
| 5 三明野生香蕉叶片gsp基因、gsp1基因cDNA全长的获得及生物信息学分析 | 第163页 |
| 6 三明野生香蕉gsp及gsp1基因DNA序列的获得 | 第163页 |
| 7 三明野生香蕉gsp及gsp1基因的实时表达分析 | 第163-165页 |
| 参考文献 | 第165-179页 |
| 附录1 三明野生香蕉叶片ChiⅠ1基因(cDNA)序列登录GenBank信息 | 第179-181页 |
| 附录2 三明野生香蕉叶片ChiⅠ2基因(cDNA)序列登录GenBank信息 | 第181-183页 |
| 附录3 三明野生香蕉叶片ChiⅠ1基因(DNA)序列登录GenBank信息 | 第183-186页 |
| 附录4 三明野生香蕉叶片ChiⅠ2基因(DNA)序列登录GenBank信息 | 第186-189页 |
| 附录5 三明野生香蕉叶片gsp基因(cDNA)序列登录GenBank信息 | 第189-191页 |
| 附录6 三明野生香蕉叶片gsp1基因(cDNA)序列登录GenBank信息 | 第191-193页 |
| 附录7 三明野生香蕉叶片gsp基因(DNA)序列登录GenBank信息 | 第193-195页 |
| 附录8 三明野生香蕉叶片gsp1基因(DNA)序列登录GenBank信息 | 第195-197页 |
| 致谢 | 第197页 |
