| 摘要 | 第14-17页 |
| Abstract | 第17-19页 |
| 1 生物大分子X射线晶体学 | 第20-41页 |
| 1.1 结构生物学简介 | 第20-21页 |
| 1.2 X射线晶体学的发展及主要流程 | 第21-24页 |
| 1.2.1 X射线 | 第21-22页 |
| 1.2.2 X射线晶体学的发展 | 第22-23页 |
| 1.2.3 X射线晶体学原理 | 第23-24页 |
| 1.2.4 X射线晶体学流程 | 第24页 |
| 1.3 蛋白质的结晶 | 第24-30页 |
| 1.3.1 蛋白质结晶原理 | 第24-26页 |
| 1.3.2 蛋白质结晶方法 | 第26-28页 |
| 1.3.2.1 蒸汽扩散法 | 第26-27页 |
| 1.3.2.2 透析结晶 | 第27页 |
| 1.3.2.3 批量微处理法 | 第27-28页 |
| 1.3.2.4 液/液扩散结晶法 | 第28页 |
| 1.3.3 影响蛋白质结晶的因素 | 第28-29页 |
| 1.3.4 获得高分辨率蛋白晶体的方法 | 第29-30页 |
| 1.4 衍射数据的收集和处理 | 第30-31页 |
| 1.5 相位的获得 | 第31-35页 |
| 1.5.1 分子置换法 | 第31-33页 |
| 1.5.2 单对或多对同晶置换法 | 第33页 |
| 1.5.3 多波长和单波长反常散射法 | 第33-34页 |
| 1.5.4 直接法 | 第34页 |
| 1.5.5 单对同晶置换及反常散射法 | 第34页 |
| 1.5.6 新型卤素快速浸泡法 | 第34-35页 |
| 1.6 相位改善和扩展 | 第35页 |
| 1.7 模型构建和结构修正 | 第35-36页 |
| 1.8 参考文献 | 第36-41页 |
| 2 人源Pelota蛋白的结构生物学研究 | 第41-127页 |
| 2.1 前言 | 第41-57页 |
| 2.1.1 Pelota的发现和结构 | 第41-44页 |
| 2.1.2 Pelota的功能 | 第44-53页 |
| 2.1.2.1 Pelota监控mRNA的质量 | 第44-48页 |
| 2.1.2.2 Pelota与细胞周期 | 第48-50页 |
| 2.1.2.3 Pelota控制生殖干细胞的自我更新 | 第50-52页 |
| 2.1.2.4 Pelota参与80S空核糖体的循环利用 | 第52-53页 |
| 2.1.3 HAX1的发现和结构 | 第53页 |
| 2.1.4 HAX1的功能 | 第53-55页 |
| 2.1.4.1 HAX1参与细胞凋亡 | 第53-54页 |
| 2.1.4.2 HAX1参与mRNA 3'端非翻译区功能 | 第54页 |
| 2.1.4.3 HAX1与细胞迁移 | 第54-55页 |
| 2.1.4.4 HAX1与病毒蛋白结合 | 第55页 |
| 2.1.4.5 HAX1与疾病发生 | 第55页 |
| 2.1.5 研究目的和意义 | 第55-57页 |
| 2.2 材料与方法 | 第57-78页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第57-65页 |
| 2.2.1.1 目的基因序列 | 第57页 |
| 2.2.1.2 实验质粒及菌种 | 第57-58页 |
| 2.2.1.3 主要试剂和仪器 | 第58-60页 |
| 2.2.1.4 常用试剂和缓冲液的配置 | 第60-65页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第65-78页 |
| 2.2.2.1 目的蛋白重组质粒的构建 | 第65-72页 |
| 2.2.2.2 重组蛋白的表达 | 第72-73页 |
| 2.2.2.3 重组蛋白的纯化 | 第73-75页 |
| 2.2.2.4 重组蛋白的结晶 | 第75-78页 |
| 2.3 实验结果 | 第78-109页 |
| 2.3.1 Pelota fl重组质粒的构建和预表达 | 第78-87页 |
| 2.3.1.1 Pelota fl重组质粒的构建 | 第78-79页 |
| 2.3.1.2 Pelota fl的预表达 | 第79-80页 |
| 2.3.1.3 Pelota fl表达纯化与结晶条件初筛 | 第80-87页 |
| 2.3.2 Pelota fl突变的表达纯化和结晶条件初筛 | 第87-90页 |
| 2.3.2.1 Pelota fl的定点突变 | 第87-89页 |
| 2.3.2.2 Pelota fl Cys258Ser的纯化及结晶 | 第89-90页 |
| 2.3.3 PelotaN端结构域的结晶 | 第90-93页 |
| 2.3.3.1 PelotaN domain的表达纯化 | 第90-91页 |
| 2.3.3.2 Pelota N domain稳定性及均一性检测 | 第91-93页 |
| 2.3.3.3 Pelota Ndomain的结晶 | 第93页 |
| 2.3.4 Pelota C domain/AT的表达纯化和结晶 | 第93-105页 |
| 2.3.4.1 Pelota C domain/AT的表达纯化 | 第93-94页 |
| 2.3.4.2 Pelota C domain/AT稳定性及均一性检测 | 第94-95页 |
| 2.3.4.3 Pelota C domain/AT的结晶 | 第95-98页 |
| 2.3.4.4 Pelota C domain/AT晶体衍射数据的收集 | 第98-99页 |
| 2.3.4.5 Pelota C domain/AT晶体结构 | 第99-101页 |
| 2.3.4.6 Pelota C domain/AT晶体结构与NMR结构对比 | 第101-103页 |
| 2.3.4.7 Pelota C domain/AT晶体结构与eRF1 domain3结构对比 | 第103-105页 |
| 2.3.5 HAX1相关实验 | 第105-109页 |
| 2.3.5.1 HAX1与Pelota作用 | 第105-106页 |
| 2.3.5.2 HAX1重组质粒的构建 | 第106-107页 |
| 2.3.5.3 HAX1预表达 | 第107-108页 |
| 2.3.5.4 HAX1与Pelota C domain/AT的共纯化 | 第108-109页 |
| 2.4 分析与讨论 | 第109-112页 |
| 2.5 小结 | 第112-113页 |
| 2.6 参考文献 | 第113-127页 |
| 3 p53上调凋亡调控因子的结构生物学研究 | 第127-221页 |
| 3.1 前言 | 第127-149页 |
| 3.1.1 细胞凋亡 | 第127-130页 |
| 3.1.1.1 线粒体凋亡途径 | 第128-129页 |
| 3.1.1.2 BCL-2家族蛋白 | 第129-130页 |
| 3.1.2 p53上调凋亡调控因子 | 第130-138页 |
| 3.1.2.1 PUMA的发现 | 第130-131页 |
| 3.1.2.2 PUMA结构特点 | 第131-132页 |
| 3.1.2.3 PUMA转录调节 | 第132-133页 |
| 3.1.2.4 PUMA促凋亡机制 | 第133-136页 |
| 3.1.2.5 PUMA与癌症治疗 | 第136-138页 |
| 3.1.3 热休克蛋白 | 第138-139页 |
| 3.1.3.1 热休克蛋白介绍 | 第138页 |
| 3.1.3.2 热休克蛋白70家族 | 第138-139页 |
| 3.1.4 Hsc70蛋白 | 第139-148页 |
| 3.1.4.1 Hsc70细胞定位 | 第141-142页 |
| 3.1.4.2 Hsc70功能 | 第142-144页 |
| 3.1.4.3 Hsc70结构 | 第144-147页 |
| 3.1.4.4 Hsc70与HSP70差异 | 第147-148页 |
| 3.1.5 研究目的与意义 | 第148-149页 |
| 3.2 材料与方法 | 第149-158页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第149-151页 |
| 3.2.1.1 目的基因序列 | 第149页 |
| 3.2.1.2 质粒及菌种 | 第149页 |
| 3.2.1.3 主要试剂和仪器 | 第149页 |
| 3.2.1.4 常用试剂和缓冲液的配置 | 第149-151页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第151-158页 |
| 3.3 实验结果 | 第158-194页 |
| 3.3.1 PUMA与Hsc70的相互作用研究 | 第158-160页 |
| 3.3.2 PUMA的表达纯化及结晶 | 第160-170页 |
| 3.3.2.1 PUMA基因优化 | 第160-161页 |
| 3.3.2.2 PUMA全长蛋白的构建和表达 | 第161-162页 |
| 3.3.2.3 PUMA模拟磷酸化的表达 | 第162-163页 |
| 3.3.2.4 截短蛋白的表达 | 第163-169页 |
| 3.3.2.5 PUMA多肽合成 | 第169-170页 |
| 3.3.3 Hsc70的表达纯化及结晶 | 第170-194页 |
| 3.3.3.1 Hsc70fl的表达 | 第170-171页 |
| 3.3.3.2 Hsc70与PUMA相互作用结构域的确定 | 第171-172页 |
| 3.3.3.3 Hsc70 ATPase的纯化及结晶 | 第172-182页 |
| 3.3.3.4 Hsc70 C△ 10 kDa的表达 | 第182-194页 |
| 3.4 分析和讨论 | 第194-197页 |
| 3.5 小结 | 第197-199页 |
| 3.6 参考文献 | 第199-221页 |
| 致谢 | 第221页 |
