| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 英文缩略词对照表 | 第10-12页 |
| 1 绪论 | 第12-28页 |
| 1.1 哺乳动物的生殖调控 | 第12-13页 |
| 1.2 GnRH对生殖调控的影响 | 第13-15页 |
| 1.3 RFRP-3/Npffr1对生殖调控的影响 | 第15-18页 |
| 1.4 microRNA在哺乳动物生殖调控中的重要作用 | 第18-25页 |
| 1.4.1 miRNA概述 | 第18-21页 |
| 1.4.2 miRNA在下丘脑水平对生殖调控的影响 | 第21-23页 |
| 1.4.3 miRNA在垂体水平对生殖调控的影响 | 第23-25页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第25-28页 |
| 2 与RFRP信号通路相关miRNA的筛选 | 第28-42页 |
| 2.1 引言 | 第28-30页 |
| 2.2 实验材料 | 第30-31页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第30页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.3 实验用部分溶液及其配制方法 | 第31页 |
| 2.2.4 分析软件与网址 | 第31页 |
| 2.3 实验方法与步骤 | 第31-36页 |
| 2.3.1 细胞的培养、接种、冻存及复苏 | 第31-32页 |
| 2.3.2 RFRP3-8处理GT1-7细胞 | 第32-33页 |
| 2.3.3 Trizol法提取细胞总RNA | 第33页 |
| 2.3.4 测序数据的处理及差异miRNA的筛选 | 第33-35页 |
| 2.3.5 靶基因预测及功能和信号通路的富集分析 | 第35页 |
| 2.3.6 与RFRP信号通路相关miRNA及其靶基因网络的构建 | 第35-36页 |
| 2.4 实验结果 | 第36-39页 |
| 2.4.1 测序数据的处理及差异miRNA的筛选 | 第36-37页 |
| 2.4.2 靶基因预测及功能和信号通路的富集分析 | 第37-38页 |
| 2.4.3 与RFRP信号通路相关miRNA及其靶基因的筛选 | 第38-39页 |
| 2.5 讨论 | 第39-40页 |
| 2.6 本章小结 | 第40-42页 |
| 3 miR155,429可以靶向调控Npffr1基因的表达 | 第42-62页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 实验材料 | 第42-46页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第42-43页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第43页 |
| 3.2.3 实验用部分溶液及其配制方法 | 第43页 |
| 3.2.4 分析软件与网址 | 第43-44页 |
| 3.2.5 主要试剂盒 | 第44页 |
| 3.2.6 主要内切酶及载体 | 第44页 |
| 3.2.7 定量引物及酶切引物设计 | 第44-46页 |
| 3.3 实验方法与步骤 | 第46-53页 |
| 3.3.1 载体的构建 | 第46-50页 |
| 3.3.2 质粒的提取 | 第50-51页 |
| 3.3.3 目的条带的切胶回收 | 第51-52页 |
| 3.3.4 细胞转染 | 第52页 |
| 3.3.5 荧光素酶报告实验 | 第52-53页 |
| 3.4 实验结果 | 第53-58页 |
| 3.4.1 TargetScan中miR155及miR429的靶位点预测 | 第53-54页 |
| 3.4.2 miR155及miR429可特异性结合Npffr1的3’UTR序列 | 第54-56页 |
| 3.4.3 miR155及miR429在Npffr1-3’UTR序列上靶位点的截断分析 | 第56-57页 |
| 3.4.4 miR155及miR429在Npffr1-3’UTR序列上靶位点的突变分析 | 第57-58页 |
| 3.5 讨论 | 第58-60页 |
| 3.6 本章小结 | 第60-62页 |
| 4 miR155,429与其靶基因Npffr1功能的初步验证 | 第62-84页 |
| 4.1 引言 | 第62-63页 |
| 4.2 实验材料 | 第63-66页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第63页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第63-64页 |
| 4.2.3 实验用部分溶液及其配制方法 | 第64页 |
| 4.2.4 分析软件与网址 | 第64页 |
| 4.2.5 主要试剂盒 | 第64页 |
| 4.2.6 主要内切酶及载体 | 第64页 |
| 4.2.7 抗体 | 第64-65页 |
| 4.2.8 定量引物及酶切引物设计 | 第65-66页 |
| 4.3 实验方法与步骤 | 第66-73页 |
| 4.3.1 细胞的培养、接种、冻存及复苏 | 第66页 |
| 4.3.2 Npffr1超表达载体的构建 | 第66-67页 |
| 4.3.3 细胞转染 | 第67-68页 |
| 4.3.4 实时荧光定量PCR检测 | 第68-70页 |
| 4.3.5 Western-blot检测 | 第70-73页 |
| 4.3.6 统计学分析 | 第73页 |
| 4.4 实验结果 | 第73-81页 |
| 4.4.1 超表达miR155,429后抑制了Npffr1mRNA及蛋白的表达 | 第73-77页 |
| 4.4.2 下调miR155,429后促进了Npffr1mRNA及蛋白的表达 | 第77-78页 |
| 4.4.3 超表达miR155,429后促进了Npffr1下游基因mRNA的表达 | 第78-79页 |
| 4.4.4 miR155,429通过下调Npffr1促进下游基因的表达 | 第79-81页 |
| 4.5 讨论 | 第81-82页 |
| 4.6 本章小结 | 第82-84页 |
| 5 全文讨论 | 第84-88页 |
| 6 后期展望 | 第88-90页 |
| 致谢 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-100页 |
| 附录 | 第100页 |
| A.作者在攻读学位期间发表的论文目录 | 第100页 |
