| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 前言 | 第12-19页 |
| 1.1 细胞程序性死亡 | 第12-15页 |
| 1.1.1 细胞程序性坏死诱因 | 第12-14页 |
| 1.1.2 细胞坏死的生理学意义 | 第14-15页 |
| 1.2 活性氧 | 第15-18页 |
| 1.2.1 活性氧的简介 | 第15页 |
| 1.2.2 活性氧的产生原因 | 第15-16页 |
| 1.2.3 活性氧的生理意义及其危害 | 第16-18页 |
| 1.3 立题背景 | 第18-19页 |
| 第二章 材料与方法 | 第19-43页 |
| 2.1 相关药品和试剂 | 第19-21页 |
| 2.1.1 哺乳动物细胞株 | 第19页 |
| 2.1.2 试剂和抗体 | 第19-20页 |
| 2.1.3 质粒构建 | 第20-21页 |
| 2.2 常用实验仪器 | 第21页 |
| 2.3 实验技术 | 第21-28页 |
| 2.3.1 细胞活性检测 | 第21-22页 |
| 2.3.2 细胞代谢检测 | 第22页 |
| 2.3.3 PDC活性检测 | 第22页 |
| 2.3.4 体外PDC激活 | 第22-23页 |
| 2.3.5 BHA抑制细胞死亡及其对大量增加OCR产量的联合反应 | 第23页 |
| 2.3.6 体外激酶检测实验 | 第23页 |
| 2.3.7 MitoSOX检测ROS | 第23-24页 |
| 2.3.8 用mito-roGFP检测线粒体氧化还原能力 | 第24页 |
| 2.3.9 TMRE染色检测线粒体活性 | 第24页 |
| 2.3.10 气相色谱分析~(13)C标记的代谢产物 | 第24-25页 |
| 2.3.11 质谱分析 | 第25-26页 |
| 2.3.12 线粒体去除实验 | 第26页 |
| 2.3.13 线粒体分离实验 | 第26页 |
| 2.3.14 高倍显微成像 | 第26-27页 |
| 2.3.15 用STORM来检测细胞内RIP3与线粒体的同定位 | 第27-28页 |
| 2.4 细胞相关实验 | 第28-32页 |
| 2.4.1 细胞培养 | 第28-29页 |
| 2.4.2 细胞转染 | 第29-30页 |
| 2.4.3 慢病毒的包装与感染 | 第30-32页 |
| 2.5 蛋白相关实验 | 第32-33页 |
| 2.5.1 蛋白电泳 | 第32-33页 |
| 2.5.2 免疫印迹 | 第33页 |
| 2.6 Knock out细胞系构建 | 第33-34页 |
| 2.7 质粒构建实验 | 第34-39页 |
| 2.7.1 聚合酶链式扩增反应(Polymerase Chain Reaction,PCR) | 第34-35页 |
| 2.7.2 连接酶非依赖性克隆Ligase Independent Clone (LIC) | 第35-36页 |
| 2.7.3 制备大肠杆菌感受态细胞 | 第36-37页 |
| 2.7.4 DNA转化 | 第37页 |
| 2.7.5 质粒DNA提取 | 第37-39页 |
| 2.8 RNA相关实验和方法 | 第39-43页 |
| 2.8.1 细胞总RNA提取 | 第39-40页 |
| 2.8.2 mRNA逆转录 | 第40-41页 |
| 2.8.3 实时荧光定量 PCR (Real-time PCR) | 第41-43页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第43-63页 |
| 3.1 TNF诱导细胞程序性坏死过程中会产生ROS | 第43-46页 |
| 3.2 细胞程序性坏死会影响细胞有氧呼吸 | 第46-48页 |
| 3.3 PDC是程序性坏死调控有氧呼吸的关键蛋白 | 第48-51页 |
| 3.4 RIP3通过磷酸化PDC-E3来激活PDC | 第51-56页 |
| 3.5 TNF刺激产生ROS能够促进程序性坏死 | 第56-61页 |
| 3.7 讨论 | 第61-63页 |
| 附录1 图表索引 | 第63-64页 |
| 附录2 缩略语及中英文对照 | 第64-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
