| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-17页 |
| 1.1 城市污泥面临的问题 | 第10-11页 |
| 1.2 剩余污泥碱性发酵产酸的研究 | 第11-12页 |
| 1.2.1 污泥碱性发酵产酸的原理 | 第11页 |
| 1.2.2 污泥厌氧发酵产酸的研究进展 | 第11-12页 |
| 1.3 PCR-DGGE技术 | 第12-14页 |
| 1.3.1 DGGE简介 | 第12页 |
| 1.3.2 PCR-DGGE技术在生物多样性分析中的应用 | 第12-13页 |
| 1.3.3 PCR-DGGE技术在活性污泥研究中的应用 | 第13-14页 |
| 1.4 挥发性脂肪酸的测定 | 第14-15页 |
| 1.5 本课题研究的目的及意义 | 第15页 |
| 1.6 本研究的技术路线 | 第15-17页 |
| 第2章 材料与方法 | 第17-32页 |
| 2.1 试验材料 | 第17-21页 |
| 2.1.1 供试材料 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂及配制 | 第17-18页 |
| 2.1.3 培养基及试剂盒 | 第18-20页 |
| 2.1.4 PCR所用引物 | 第20页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.2 试验方法 | 第21-32页 |
| 2.2.1 厌氧菌的分离与纯化 | 第21-22页 |
| 2.2.2 蛋白酶产生菌的初筛 | 第22页 |
| 2.2.3 蛋白酶产生菌的复筛 | 第22-23页 |
| 2.2.4 蛋白酶产生菌产酶条件的研究 | 第23-26页 |
| 2.2.5 剩余污泥碱性厌氧发酵试验 | 第26页 |
| 2.2.6 VFAs的测定 | 第26页 |
| 2.2.7 利用16SrDNA进行功能菌的系统发育分析 | 第26-30页 |
| 2.2.8 DGGE条件优化 | 第30页 |
| 2.2.9 DGGE方法检测 | 第30页 |
| 2.2.10 DGGE图谱分析 | 第30-32页 |
| 第3章 结果与分析 | 第32-66页 |
| 3.1 蛋白酶产生菌的分离 | 第32页 |
| 3.2 蛋白酶产生菌的初筛 | 第32页 |
| 3.3 两株蛋白酶产生菌的菌株鉴定 | 第32-36页 |
| 3.3.1 菌株的形态学观察及生理生化鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3.2 分子生物学鉴定结果 | 第33-34页 |
| 3.3.3 基因测序与分析结果 | 第34-36页 |
| 3.4 蛋白酶产生菌的复筛 | 第36-42页 |
| 3.4.1 酪氨酸标准曲线的制定 | 第36页 |
| 3.4.2 两株蛋白酶产生菌酶活力的初步测定 | 第36页 |
| 3.4.3 两株蛋白酶产生菌发酵条件确定 | 第36-39页 |
| 3.4.4 发酵条件的正交试验 | 第39-40页 |
| 3.4.5 验证试验 | 第40页 |
| 3.4.6 产酶培养基成分的优化 | 第40-42页 |
| 3.4.7 验证试验 | 第42页 |
| 3.5 剩余污泥碱性VFAs的测定 | 第42-47页 |
| 3.5.1 碱性发酵剩余污泥基因组的提取 | 第44-45页 |
| 3.5.2 剩余污泥细菌的巢式PCR扩增结果 | 第45-46页 |
| 3.5.3 PCR扩增产物纯化回收结果 | 第46-47页 |
| 3.6 DGGE条件优化 | 第47-49页 |
| 3.6.1 凝胶变性剂浓度的确定 | 第47-48页 |
| 3.6.2 纯化对DGGE图谱的影响 | 第48-49页 |
| 3.6.3 DGGE电泳时间的确定 | 第49页 |
| 3.7 DGGE电泳及其图谱分析 | 第49-66页 |
| 3.7.1 连续发酵的原泥DGGE图谱及分析 | 第49-53页 |
| 3.7.2 连续碱性发酵剩余污泥DGGE图谱及分析 | 第53-57页 |
| 3.7.3 接入混合菌的碱性发酵剩余污泥DGGE图谱及分析 | 第57-61页 |
| 3.7.4 DGGE图谱综合分析 | 第61-66页 |
| 第4章 讨论 | 第66-70页 |
| 4.1 课题背景 | 第66页 |
| 4.2 高产蛋白酶菌株筛选的研究意义 | 第66-67页 |
| 4.3 不同发酵阶段剩余污泥中细菌种群的变化 | 第67-68页 |
| 4.4 DGGE法分析剩余污泥微生物多样性的可行性探讨 | 第68页 |
| 4.5 挥发酸测定的必要性 | 第68-70页 |
| 第5章 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第80页 |
