| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 引言 | 第12-26页 |
| 1.1 几丁质、水溶性壳聚糖及几丁寡糖 | 第12-15页 |
| 1.1.1 几丁质 | 第12-14页 |
| 1.1.2 水溶性壳聚糖 | 第14-15页 |
| 1.1.3 几丁寡糖 | 第15页 |
| 1.2 几丁质酶的研究现状 | 第15-19页 |
| 1.2.1 产几丁质酶的微生物种类 | 第15-16页 |
| 1.2.2 微生物中几丁质酶的类型 | 第16-18页 |
| 1.2.3 几丁质酶降解几丁质的途径 | 第18页 |
| 1.2.4 几丁质酶的理化性质 | 第18-19页 |
| 1.3 几丁质酶的结构与催化机理 | 第19-22页 |
| 1.3.1 分子结构 | 第19-20页 |
| 1.3.2 催化机理 | 第20-22页 |
| 1.4 N-乙酰氨基葡萄糖的测定方法 | 第22-23页 |
| 1.5 应用 | 第23-24页 |
| 1.5.1 几丁质及其衍生物的应用 | 第23页 |
| 1.5.2 几丁质酶的应用 | 第23-24页 |
| 1.5.3 几丁寡糖的应用 | 第24页 |
| 1.6 本研究的意义、目的及内容 | 第24-26页 |
| 第2章 pETM-LlChi18A在E.coli中的诱导表达 | 第26-37页 |
| 2.1 前言 | 第26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.2.1 质粒与宿主菌 | 第26-27页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第27页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第27-28页 |
| 2.2.4 培养基和常用试剂的配制 | 第28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-30页 |
| 2.3.1 E.coliBL21(DE3)感受态的制备 | 第28-29页 |
| 2.3.2 重组质粒pETM-LlChi18A的转化 | 第29页 |
| 2.3.3 PCR检测E.coli中的重组质粒 | 第29页 |
| 2.3.4 重组质粒pETM-LlChi18A的诱导表达 | 第29页 |
| 2.3.5 重组蛋白的可溶性分析 | 第29页 |
| 2.3.6 蛋白的SDS-PAGE检测 | 第29-30页 |
| 2.3.7 pETM-LlChi18A诱导表达条件的优化 | 第30页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第30-36页 |
| 2.4.1 pETM-LlChi18A的转导 | 第30-31页 |
| 2.4.2 PCR检测结果 | 第31-32页 |
| 2.4.3 IPTG诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第32页 |
| 2.4.4 重组蛋白的可溶性分析 | 第32-33页 |
| 2.4.5 温度对IPTG诱导表达的影响 | 第33-34页 |
| 2.4.6 诱导时间对IPTG诱导表达的影响 | 第34-35页 |
| 2.4.7 IPTG诱导量对IPTG诱导表达的影响 | 第35-36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-37页 |
| 第3章 几丁质酶LlChi18A纯化及包涵体复性 | 第37-53页 |
| 3.1 前言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-39页 |
| 3.2.1 菌株 | 第37页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第38页 |
| 3.2.4 常用试剂的配制 | 第38-39页 |
| 3.3 实验方法 | 第39-42页 |
| 3.3.1 几丁质酶LlChi18A重组蛋白纯化 | 第39页 |
| 3.3.2 蛋白质浓度的测定 | 第39页 |
| 3.3.3 SDS-PAGE分析 | 第39-40页 |
| 3.3.4 荧光法测酶活 | 第40页 |
| 3.3.5 几丁质酶LlChi18A包涵体复性 | 第40-41页 |
| 3.3.6 复性条件对包涵体复性的影响 | 第41页 |
| 3.3.7 pH和温度对酶活的影响 | 第41页 |
| 3.3.8 金属离子对酶活的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.9 反应时间对酶活的影响 | 第42页 |
| 3.4 结果与分析 | 第42-51页 |
| 3.4.1 重组几丁质酶LlChi18A的纯化 | 第42-43页 |
| 3.4.2 蛋白质标准曲线及目的蛋白浓度 | 第43-44页 |
| 3.4.3 荧光测定4-MU标准曲线及酶活 | 第44页 |
| 3.4.4 透析复性与亲和层析柱上复性的比较 | 第44-46页 |
| 3.4.5 亲和层析柱上复性影响酶活的因素 | 第46-48页 |
| 3.4.6 pH及温度、反应时间对重组蛋白酶活的影响 | 第48-50页 |
| 3.4.7 金属离子对酶活的影响 | 第50-51页 |
| 3.5 本章小结 | 第51-53页 |
| 第4章 几丁质酶催化不同底物的反应条件及产物研究 | 第53-66页 |
| 4.1 前言 | 第53页 |
| 4.2 实验材料 | 第53-55页 |
| 4.2.1 菌株 | 第53-54页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第54页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第54-55页 |
| 4.2.4 常用试剂的配制 | 第55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-57页 |
| 4.3.1 不同底物的制备 | 第55页 |
| 4.3.2 酶的底物特异性 | 第55-56页 |
| 4.3.3 动力学方程 | 第56页 |
| 4.3.4 几丁质酶对不同底物的酶学性质 | 第56-57页 |
| 4.3.5 几丁质酶降解产物的分析 | 第57页 |
| 4.4 结果与分析 | 第57-64页 |
| 4.4.1 还原糖标准曲线的绘制 | 第57-58页 |
| 4.4.2 几丁质酶的底物特异性 | 第58-59页 |
| 4.4.3 动力学方程 | 第59-60页 |
| 4.4.4 反应pH值对酶活的影响 | 第60页 |
| 4.4.5 反应温度对酶活的影响 | 第60-61页 |
| 4.4.6 金属离子对酶活的影响 | 第61-62页 |
| 4.4.7 表面活性剂对酶活的影响 | 第62-63页 |
| 4.4.8 几丁质酶降解产物的分析 | 第63-64页 |
| 4.5 本章小结 | 第64-66页 |
| 第5章 酶法降解降解废菌丝体制备几丁寡糖的研究 | 第66-80页 |
| 5.1 前言 | 第66页 |
| 5.2 实验材料 | 第66-68页 |
| 5.2.1 原材料 | 第66-67页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第67页 |
| 5.2.3 主要仪器 | 第67-68页 |
| 5.2.4 常用试剂的配制 | 第68页 |
| 5.2.5 检测方法 | 第68页 |
| 5.3 实验方法 | 第68-70页 |
| 5.3.1 废菌丝体预处理 | 第68页 |
| 5.3.2 浸泡废菌丝体 | 第68-69页 |
| 5.3.3 酶解废菌丝体破壁 | 第69页 |
| 5.3.4 几丁质酶降解废菌丝体 | 第69页 |
| 5.3.5 几丁质酶降解条件的优化 | 第69-70页 |
| 5.3.6 废菌丝体降解产物的HPLC/MS检测 | 第70页 |
| 5.3.7 几丁寡糖的产率 | 第70页 |
| 5.4 结果与分析 | 第70-79页 |
| 5.4.1 最适浸泡废菌丝体的试剂和时间 | 第70-71页 |
| 5.4.2 最适酶解废菌丝体的酶和酶解时间 | 第71-72页 |
| 5.4.3 几丁质酶降解条件的优化 | 第72-76页 |
| 5.4.4 降解产物的HPLC/MS检测 | 第76-77页 |
| 5.4.5 几丁寡糖产率 | 第77-79页 |
| 5.5 本章小结 | 第79-80页 |
| 第6章 展望与总结 | 第80-83页 |
| 6.1 总结 | 第80-81页 |
| 6.2 创新点 | 第81页 |
| 6.3 展望 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 附录 | 第90页 |
