| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 引言 | 第11-19页 |
| 1.1 黑孢块菌特征香味活性物质—挥发性有机含硫化合物 | 第11页 |
| 1.2 VOSCs生物合成途径的解析 | 第11-13页 |
| 1.3 VOSCs生物合成途径分子基础的建立 | 第13-17页 |
| 1.3.1 VOSCs生物合成途径中合成酶基因的分离 | 第13-14页 |
| 1.3.2 与VOSCs合成相关基因的分离技术 | 第14-17页 |
| 1.4 本论文的研究目的、意义及主要研究内容 | 第17-19页 |
| 第2章 VOSCs合成基因的同源克隆和表达分析 | 第19-36页 |
| 2.1 引言 | 第19页 |
| 2.2 材料与方法 | 第19-29页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第19页 |
| 2.2.2 试剂、耗材与仪器 | 第19-21页 |
| 2.2.3 黑孢块菌总RNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.4 cDNA的合成 | 第22页 |
| 2.2.5 VOSCs合成酶基因的同源克隆 | 第22-25页 |
| 2.2.6 VOSCs合成酶全长基因克隆与分析 | 第25-28页 |
| 2.2.7 VOSCs合成酶基因转录表达分析 | 第28-29页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第29-35页 |
| 2.3.1 RNA提取结果 | 第29-30页 |
| 2.3.2 VOSCs合成酶基因的同源克隆及序列分析 | 第30-31页 |
| 2.3.3 VOSCs合成酶基因cDNA5'端和3'端未知序列的克隆 | 第31-33页 |
| 2.3.4 5'和3'端基因重组质粒阳性克隆的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.5 VOSCs合成酶基因的转录表达分析 | 第34-35页 |
| 2.4 小结 | 第35-36页 |
| 第3章 VOSCs生物合成新型基因的筛选与分析 | 第36-72页 |
| 3.1 前言 | 第36-37页 |
| 3.2 材料与方法 | 第37-49页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第37页 |
| 3.2.2 试剂与仪器 | 第37-38页 |
| 3.2.3 主要试剂配方 | 第38页 |
| 3.2.4 提取黑孢块菌的总RNA | 第38-39页 |
| 3.2.5 SMARTercDNA的合成 | 第39-41页 |
| 3.2.6 消减cDNA文库的构建 | 第41-45页 |
| 3.2.7 利用斑点杂交技术筛选文库 | 第45-48页 |
| 3.2.8 实时荧光半定量RT-PCR | 第48-49页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第49-67页 |
| 3.3.1 黑孢块菌总RNA的分离 | 第49-50页 |
| 3.3.2 双链cDNA的合成及RsaI酶切结果 | 第50-52页 |
| 3.3.3 差异表达片段的富集 | 第52-53页 |
| 3.3.4 差异表达基因cDNA片段的T/A克隆 | 第53页 |
| 3.3.5 文库重组子的鉴定 | 第53-54页 |
| 3.3.6 筛选探针的制备与标记效率的检测 | 第54-55页 |
| 3.3.7 斑点杂交结果 | 第55-57页 |
| 3.3.8 差异表达克隆的序列分析 | 第57-67页 |
| 3.4 讨论 | 第67-70页 |
| 3.4.1 SMART技术的讨论 | 第67-69页 |
| 3.4.2 抑制性消减杂交技术的讨论 | 第69-70页 |
| 3.5 小结 | 第70-72页 |
| 第4章 过表达Ubi346调控VOSCs生物合成途径 | 第72-93页 |
| 4.1 前言 | 第72页 |
| 4.2 材料与方法 | 第72-81页 |
| 4.2.1 菌株及质粒 | 第72-73页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第73页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第73页 |
| 4.2.4 实验方法与步骤 | 第73-81页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第81-92页 |
| 4.3.1 黑孢块菌基因组DNA的提取 | 第81页 |
| 4.3.2 Ubi346基因的5'端未知序列的克隆及序列分析 | 第81-83页 |
| 4.3.3 Ubi346全长基因序列分析 | 第83页 |
| 4.3.4 Ubi346ORF的扩增 | 第83-84页 |
| 4.3.5 Ubi346过表达质粒的构建 | 第84-87页 |
| 4.3.6 Ubi346过表达转化子对VOSCs生物合成的影响 | 第87-92页 |
| 4.4 小结 | 第92-93页 |
| 第5章 总结与展望 | 第93-95页 |
| 5.1 总结 | 第93-94页 |
| 5.1.1 VOSCs合成基因的同源克隆和表达分析 | 第93页 |
| 5.1.2 VOSCs生物合成新型基因的筛选与分析 | 第93-94页 |
| 5.1.3 过表达Ubi346调控VOSCs生物合成途径 | 第94页 |
| 5.2 展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
