| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 引言 | 第11-32页 |
| 1.1 植物莽草酸途径概述及研究进展 | 第11-19页 |
| 1.1.1 植物莽草酸途径概述 | 第11-13页 |
| 1.1.2 植物莽草酸途径的重要意义 | 第13-15页 |
| 1.1.3 莽草酸途径入口酶DAHPS的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.1.3.1 微生物中DAHPS的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.1.3.2 植物中DAHPS的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.1.4 苯丙烷代谢途径入口酶CM的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2 葡萄类黄酮代谢概述及研究进展 | 第19-27页 |
| 1.2.1 葡萄花色苷的生物合成及生理功能 | 第21-23页 |
| 1.2.2 葡萄黄烷-3-醇的生物合成及生理功能 | 第23-25页 |
| 1.2.3 葡萄黄酮醇的生物合成及生理功能 | 第25-26页 |
| 1.2.4 葡萄类黄酮代谢的转录调控 | 第26-27页 |
| 1.2.5 环境因子对葡萄莽草酸途径和类黄酮代谢的影响 | 第27页 |
| 1.3 本研究目的和意义 | 第27-31页 |
| 1.3.1 环境因子对葡萄莽草酸途径的影响 | 第29-30页 |
| 1.3.2 环境因子对类黄酮代谢的影响 | 第30-31页 |
| 1.4 葡萄避雨栽培的概述及研究进展 | 第31-32页 |
| 第二章 两种栽培模式下葡萄莽草酸途径-类黄酮代谢的相关性 | 第32-65页 |
| 2.1 试验材料 | 第32-36页 |
| 2.1.1 试验设计 | 第32-33页 |
| 2.1.2 葡萄样品 | 第33-34页 |
| 2.1.3 试剂与溶液 | 第34页 |
| 2.1.3.1 试剂与标准品 | 第34页 |
| 2.1.3.2 溶液的配制 | 第34页 |
| 2.1.4 本章试验中所使用引物序列 | 第34-36页 |
| 2.1.5 实验仪器及设备 | 第36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-42页 |
| 2.2.1 葡萄果实理化指标的测定 | 第36-37页 |
| 2.2.2 果皮总酚的提取和定量检测 | 第37页 |
| 2.2.3 果皮花色苷、黄酮醇和黄烷醇类物质的提取和定量检测 | 第37-39页 |
| 2.2.3.1 葡萄果皮花色苷的提取和定量检测 | 第37-38页 |
| 2.2.3.2 葡萄果皮黄酮醇的提取和定量检测 | 第38页 |
| 2.2.3.3 葡萄果皮黄烷-3-醇的提取和定量检测 | 第38-39页 |
| 2.2.4 果皮总RNA提取 | 第39-40页 |
| 2.2.4.1 葡萄果皮总RNA的提取 | 第39-40页 |
| 2.2.4.2 核酸电泳检测 | 第40页 |
| 2.2.5 Real Time-PCR进行转录分析 | 第40-41页 |
| 2.2.5.1 cDNA的合成 | 第40-41页 |
| 2.2.5.2 Real Time-PCR分析 | 第41页 |
| 2.2.6 数据处理与统计分析 | 第41-42页 |
| 2.3 结果与分析 | 第42-57页 |
| 2.3.1 避雨栽培对果际和叶幕微环境的影响 | 第42-45页 |
| 2.3.2 避雨栽培对果实成熟进程的影响 | 第45-46页 |
| 2.3.3 避雨栽培对葡萄发育过程中果皮总酚含量的影响 | 第46页 |
| 2.3.4 避雨栽培对葡萄发育过程中果皮花色苷含量的影响 | 第46-50页 |
| 2.3.4.1 避雨栽培对花色苷总量和种类的影响 | 第47-49页 |
| 2.3.4.2 避雨栽培对3'5'-取代和3'-取代花色苷含量的影响 | 第49页 |
| 2.3.4.3 避雨栽培对花色苷甲基化程度的影响 | 第49-50页 |
| 2.3.4.4 避雨栽培对不同酰化花色苷含量变化的影响 | 第50页 |
| 2.3.5 避雨栽培对葡萄发育过程中果皮黄烷醇含量的影响 | 第50-53页 |
| 2.3.5.1 避雨栽培对黄烷醇总量的影响 | 第50-52页 |
| 2.3.5.2 避雨栽培对黄烷醇不同单体含量的影响 | 第52页 |
| 2.3.5.3 避雨栽培对3'5'-取代和3'-取代黄烷醇含量的影响 | 第52-53页 |
| 2.3.5.4 避雨栽培对不同顺反结构黄烷醇含量的影响 | 第53页 |
| 2.3.6 避雨栽培对葡萄发育过程中果皮黄酮醇含量的影响 | 第53-57页 |
| 2.3.7 避雨栽培对葡萄发育过程中莽草酸-类黄酮代谢的转录调控 | 第57页 |
| 2.4 讨论 | 第57-62页 |
| 2.4.1 避雨栽培对'赤霞珠'果实品质的影响 | 第57-61页 |
| 2.4.2 避雨栽培下类黄酮代谢物质积累与莽草酸-苯丙烷代谢基因表达的相关性 | 第61-62页 |
| 2.5 小结 | 第62-65页 |
| 第三章 VvDAHPS和VvCM的体外原核表达和生化性质分析 | 第65-86页 |
| 3.1 实验材料 | 第65-67页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第65页 |
| 3.1.2 载体和菌株 | 第65-66页 |
| 3.1.3 本章实验中所使用引物序列 | 第66页 |
| 3.1.4 实验仪器及设备 | 第66页 |
| 3.1.5 化学试剂和试剂盒 | 第66-67页 |
| 3.1.6 培养基与溶液 | 第67页 |
| 3.2 实验方法 | 第67-74页 |
| 3.2.1 分子生物学实验 | 第67-70页 |
| 3.2.1.1 葡萄果实总RNA的提取 | 第67页 |
| 3.2.1.2 核酸电泳检测 | 第67-68页 |
| 3.2.1.3 PCR | 第68页 |
| 3.2.1.4 PCR产物和酶切产物的纯化 | 第68页 |
| 3.2.1.5 目的片段与载体的酶切、纯化 | 第68-69页 |
| 3.2.1.6 目的片段与载体的连接 | 第69页 |
| 3.2.1.7 重组质粒转化大肠杆菌 | 第69页 |
| 3.2.1.8 重组质粒DNA的提取 | 第69-70页 |
| 3.2.1.9 重组质粒的鉴定 | 第70页 |
| 3.2.2 蛋白实验 | 第70-71页 |
| 3.2.2.1 SDA-PAGE | 第70页 |
| 3.2.2.2 诱导原核表达融合蛋白 | 第70-71页 |
| 3.2.2.3 可溶性原核表达融合蛋白的纯化 | 第71页 |
| 3.2.3 VvDAHPS原核表达蛋白酶活检测 | 第71-72页 |
| 3.2.3.1 VvDAHPS原核表达蛋白酶活检测方法的建立 | 第71-72页 |
| 3.2.3.2 不同pH对VvDAHPS活性的影响 | 第72页 |
| 3.2.3.3 不同金属离子对VvDAHPS活性的影响 | 第72页 |
| 3.2.3.4 不同芳香族氨基酸对VvDAHPS活性的影响 | 第72页 |
| 3.2.4 VvCM原核表达蛋白酶活检测 | 第72-74页 |
| 3.2.4.1 VvCM原核表达蛋白酶活检测方法的建立 | 第72-73页 |
| 3.2.4.2 不同pH对VvCM活性的影响 | 第73页 |
| 3.2.4.3 不同芳香族氨基酸对VvCM活性的影响 | 第73-74页 |
| 3.2.5 数据处理与统计分析 | 第74页 |
| 3.3 结果与分析 | 第74-84页 |
| 3.3.1 VvDAHPS的体外原核表达及生化性质分析 | 第74-78页 |
| 3.3.1.1 VvDAHPS1和VvDAHPS2的全长克隆和序列分析 | 第74-75页 |
| 3.3.1.2 VvDAHPS1和VvDAHPS2重组蛋白的表达和纯化 | 第75-77页 |
| 3.3.1.3 VvDAHPS1和VvDAHPS2重组蛋白体外酶学活性的测定 | 第77页 |
| 3.3.1.4 不同pH对VvDAHPS活性的影响 | 第77-78页 |
| 3.3.1.5 不同金属离子对VvDAHPS活性的影响 | 第78页 |
| 3.3.1.6 不同芳香族氨基酸对VvDAHPS活性的影响 | 第78页 |
| 3.3.2 VvCM的体外原核表达及生化性质分析 | 第78-84页 |
| 3.3.2.1 VvCM1和VvCM2的全长克隆和序列分析 | 第78-80页 |
| 3.3.2.2 VvCM1和VvCM2重组蛋白的表达和纯化 | 第80页 |
| 3.3.2.3 VvCM1和VvCM2重组蛋白体外酶学活性的测定 | 第80-82页 |
| 3.3.2.4 不同pH对VvCM活性的影响 | 第82-83页 |
| 3.3.2.6 不同芳香族氨基酸对VvCM活性的影响 | 第83-84页 |
| 3.4 讨论 | 第84-85页 |
| 3.5 小结 | 第85-86页 |
| 第四章 VvMYBPA1、VvMYB5b对VvDAHPS和VvCM表达的转录调节 | 第86-100页 |
| 4.1 实验材料 | 第86-88页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第86页 |
| 4.1.2 载体和菌株 | 第86页 |
| 4.1.3 实验仪器及设备 | 第86-87页 |
| 4.1.4 化学试剂和试剂盒 | 第87页 |
| 4.1.5 抗生素 | 第87页 |
| 4.1.6 培养基与溶液 | 第87-88页 |
| 4.2 实验方法 | 第88-90页 |
| 4.2.1 分子生物学实验 | 第88-89页 |
| 4.2.1.1 葡萄果实总RNA的提取 | 第88页 |
| 4.2.1.2 核酸电泳检测 | 第88页 |
| 4.2.1.3 PCR | 第88页 |
| 4.2.1.4 PCR产物和酶切产物的纯化 | 第88页 |
| 4.2.1.5 目的片段与载体的酶切、纯化 | 第88页 |
| 4.2.1.6 目的片段与载体的连接 | 第88页 |
| 4.2.1.7 重组质粒转化大肠杆菌 | 第88页 |
| 4.2.1.8 重组质粒DNA的提取 | 第88页 |
| 4.2.1.9 重组质粒的鉴定 | 第88页 |
| 4.2.1.10 农杆菌感受态的制备 | 第88-89页 |
| 4.2.1.11 农杆菌的转化及阳性克隆的鉴定 | 第89页 |
| 4.2.1.12 本生烟叶片注射及荧光素酶表达实验 | 第89页 |
| 4.2.2 蛋白实验 | 第89-90页 |
| 4.2.2.1 SDA-PAGE | 第89页 |
| 4.2.2.2 诱导原核表达融合蛋白 | 第89页 |
| 4.2.2.3 可溶性原核表达融合蛋白的纯化 | 第89-90页 |
| 4.3 结果与分析 | 第90-97页 |
| 4.3.1 葡萄中VvCM1和VvCM2基因启动子序列的克隆与分析 | 第90-91页 |
| 4.3.2 VvCM1和VvCM2基因启动子的功能验证 | 第91-92页 |
| 4.3.2.1 pCM1-LUC和pCM2-LUC载体构建 | 第92页 |
| 4.3.2.2 注射本生烟叶片 | 第92页 |
| 4.3.3 VvDAHPS2,VvCM1和VvCM2基因启动子对遮光的响应 | 第92-96页 |
| 4.3.4 VvMYBPA1、VvMYB5b调控VvDAHPS2,VvCM1和VvCM2转录时的相互作用 | 第96-97页 |
| 4.3.4.1 VvMYBPA1和VvMYB5b基因的全长克隆及序列分析 | 第96页 |
| 4.3.4.2 本生烟叶片表达荧光素酶实验 | 第96-97页 |
| 4.4 讨论 | 第97-99页 |
| 4.5 小结 | 第99-100页 |
| 第五章 全文总结及展望 | 第100-101页 |
| 5.1 全文总结 | 第100页 |
| 5.2 下一步研究设想 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 个人简介 | 第115页 |
