| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| 1 叶绿体的发育及其调控叶绿体发育的研究进展 | 第14-21页 |
| 1.1 叶绿体的差异发育 | 第14-16页 |
| 1.1.1 单子叶、双子叶中叶绿体的差异发育 | 第14-15页 |
| 1.1.2 真叶、子叶中叶绿体的差异发育 | 第15-16页 |
| 1.1.3 不同幼苗种类中叶绿体的差异发育 | 第16页 |
| 1.2 叶绿体发育的影响因素 | 第16-17页 |
| 1.3 叶绿体发育的调控 | 第17-21页 |
| 1.3.1 光照调控叶绿体的发育 | 第17页 |
| 1.3.2 植物激素调控叶绿体的发育 | 第17-18页 |
| 1.3.3 生物信号调控叶绿体的发育 | 第18-19页 |
| 1.3.4 非生物胁迫调控叶绿体的发育 | 第19页 |
| 1.3.5 蛋白调控叶绿体的发育 | 第19-21页 |
| 2 蛋白互作技术的研究进展 | 第21-24页 |
| 2.1 酵母双杂技术 | 第21-22页 |
| 2.2 亲和纯化和免疫共沉淀 | 第22-23页 |
| 2.3 双分子荧光互补 | 第23-24页 |
| 3 本研究的意义和目的 | 第24-25页 |
| 第二章 DGP1互作蛋白的酵母双杂交筛选 | 第25-46页 |
| 1 材料 | 第25-26页 |
| 1.1 植物材料 | 第25页 |
| 1.2 质粒和菌株 | 第25-26页 |
| 1.3 化学试剂和酶 | 第26页 |
| 1.4 试剂盒 | 第26页 |
| 2 实验方法 | 第26-35页 |
| 2.1 酵母文库的构建 | 第26-29页 |
| 2.1.1 RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.1.2 cDNA的合成 | 第27页 |
| 2.1.3 cDNA文库的构建 | 第27-28页 |
| 2.1.4 cDNA文库质量的检测 | 第28页 |
| 2.1.5 初级cDNA文库百万克隆扩增及质粒提取 | 第28页 |
| 2.1.6 酵母文库的制作 | 第28-29页 |
| 2.2 酵母双杂交表达载体的构建 | 第29-31页 |
| 2.2.1 PCR扩增目的基因片段 | 第29-30页 |
| 2.2.2 酶切和连接 | 第30页 |
| 2.2.3 大肠杆菌JM109感受态的制备 | 第30页 |
| 2.2.4 大肠杆菌JM109的热激转化 | 第30-31页 |
| 2.2.5 阳性克隆的鉴定与测序 | 第31页 |
| 2.3 酵母转化实验 | 第31-32页 |
| 2.3.1 酵母Y2H GOLD感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.3.2 重组质粒转化酵母 | 第31-32页 |
| 2.4 诱饵蛋白的自激活检测 | 第32页 |
| 2.5 互作蛋白的筛选 | 第32-34页 |
| 2.5.1 Mating实验和二缺筛选 | 第32-33页 |
| 2.5.2 四缺筛选 | 第33页 |
| 2.5.3 酵母质粒的提取 | 第33-34页 |
| 2.5.4 转入大肠杆菌(Top10)感受态细胞及测序分析 | 第34页 |
| 2.6 蛋白的互作验证 | 第34-35页 |
| 2.6.1 感受态的制备和共转入酵母感受态细胞 | 第34页 |
| 2.6.2 二缺和四缺筛选 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-43页 |
| 3.1 酵母cDNA文库构建 | 第35-36页 |
| 3.1.1 RNA质量的检测 | 第35页 |
| 3.1.2 合成cDNA质量的检测 | 第35-36页 |
| 3.1.3 cDNA文库的检测 | 第36页 |
| 3.2 诱饵载体的构建及自激活检测 | 第36-37页 |
| 3.3 酵母双杂筛选 | 第37-38页 |
| 3.4 GLK1、GLK2与DGP1蛋白互作的酵母双杂一对一验证 | 第38-39页 |
| 3.5 GLK1、GLK2不同结构域与DGP1的蛋白互作分析 | 第39-43页 |
| 4 讨论 | 第43-46页 |
| 第三章 DGP1与GLK蛋白互作的体外Pull-down分析 | 第46-54页 |
| 1 材料与方法 | 第46-50页 |
| 1.1 材料 | 第46-47页 |
| 1.1.1 质粒、菌株及其抗体 | 第46页 |
| 1.1.2 药品、试剂及试剂盒 | 第46-47页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第47页 |
| 1.2 原核表达目的蛋白的获得 | 第47-48页 |
| 1.2.1 原核表达载体的构建 | 第47页 |
| 1.2.2 BL21 (DE3)感受态的制备及载体质粒的转化 | 第47页 |
| 1.2.3 IPTG诱导原核表达目的蛋白 | 第47页 |
| 1.2.4 亲和层析纯化 | 第47-48页 |
| 1.3 原核蛋白的检测 | 第48-49页 |
| 1.3.1 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第48页 |
| 1.3.2 考马斯亮蓝R250的染色与脱色 | 第48页 |
| 1.3.3 原核表达蛋白的可溶性检测 | 第48-49页 |
| 1.3.4 Western Blot检测 | 第49页 |
| 1.4 GST-Pull down实验 | 第49-50页 |
| 2 结果分析 | 第50-53页 |
| 2.1 原核表达载体的构建 | 第50-51页 |
| 2.2 可溶性目的蛋白的获得 | 第51页 |
| 2.3 蛋白互作的验证 | 第51-53页 |
| 3 讨论 | 第53-54页 |
| 第四章 Pull-down筛选水稻总蛋白中与DGP1的互作蛋白 | 第54-66页 |
| 1 材料与方法 | 第54-59页 |
| 1.1 主要仪器 | 第54页 |
| 1.2 主要试剂 | 第54-55页 |
| 1.3 实验方法 | 第55-59页 |
| 1.3.1 水稻总蛋白的提取 | 第55页 |
| 1.3.2 Pull-down及SDS-PAGE凝胶电泳 | 第55页 |
| 1.3.3 SDS-PAGE凝胶的银染 | 第55-56页 |
| 1.3.4 银染条带的脱色 | 第56页 |
| 1.3.5 蛋白的酶解 | 第56-57页 |
| 1.3.6 质谱的检测 | 第57-58页 |
| 1.3.7 数据库的检索 | 第58-59页 |
| 1.3.8 筛选鉴定出的互作蛋白的酵母载体构建及与DGP1的互作验证 | 第59页 |
| 2 结果分析 | 第59-64页 |
| 2.1 Pull-down筛选水稻总蛋白中与DGP1的互作蛋白 | 第59-60页 |
| 2.2 Pull-down筛选出的与DGP1互作蛋白的质谱分析 | 第60-61页 |
| 2.3 筛选鉴定出的互作蛋白的酵母载体构建及与DGP1的互作验证 | 第61-64页 |
| 3 讨论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-79页 |
| 附录 | 第79-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第85-87页 |
