| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-35页 |
| 1 苹果茎痘病毒和苹果茎沟病毒研究进展 | 第15-27页 |
| 1.1 苹果茎痘病毒的研究进展 | 第15-19页 |
| 1.1.1 苹果茎痘病毒分类地位及株系划分、病毒粒子特性 | 第15-16页 |
| 1.1.2 苹果茎痘病毒分子生物学特性 | 第16-17页 |
| 1.1.3 苹果茎痘病毒的发生范围、寄主及传播途径 | 第17-18页 |
| 1.1.4 苹果茎痘病毒的细胞病理 | 第18页 |
| 1.1.5 感染苹果茎痘病毒的症状 | 第18-19页 |
| 1.2 苹果茎沟病毒的研究进展 | 第19-23页 |
| 1.2.1 苹果茎沟病毒分类地位及株系划分、病毒粒子特性 | 第19-20页 |
| 1.2.2 苹果茎沟病毒分子生物学特性 | 第20-21页 |
| 1.2.3 苹果茎沟病毒的发生范围,寄主及传播途径 | 第21-22页 |
| 1.2.4 苹果茎沟病毒的细胞病理 | 第22页 |
| 1.2.5 苹果茎沟病毒的侵染症状 | 第22-23页 |
| 1.3 果树病毒检测技术研究进展 | 第23-26页 |
| 1.3.1 指示植物法 | 第23-24页 |
| 1.3.2 电子显微镜检测技术 | 第24页 |
| 1.3.3 分子生物学检测方法 | 第24-25页 |
| 1.3.4 血清学检测技术 | 第25-26页 |
| 1.4 果树病毒的防治策略 | 第26-27页 |
| 1.4.1 果树的脱毒技术 | 第26-27页 |
| 1.4.2 田间生产防控 | 第27页 |
| 2 单克隆抗体技术 | 第27-34页 |
| 2.1 单克隆抗体的结构 | 第27-29页 |
| 2.2 单克隆抗体的原理 | 第29-30页 |
| 2.3 单克隆抗体的基本操作流程 | 第30页 |
| 2.4 单克隆技术的发展 | 第30-31页 |
| 2.5 单克隆抗体在植物病毒检测中的应用 | 第31-34页 |
| 3 研究目的和意义 | 第34-35页 |
| 第二章 苹果茎痘病毒梨分离物单克隆抗体的制备及应用 | 第35-62页 |
| 1 材料与方法 | 第35-51页 |
| 1.1 病毒材料 | 第35页 |
| 1.2 实验生化试剂 | 第35页 |
| 1.3 pET-28a-ASPV-CP原核表达载体的构建 | 第35-39页 |
| 1.4 ASPV CP蛋白的原核表达及纯化 | 第39-43页 |
| 1.4.1 ASPV CP大量表达 | 第39-40页 |
| 1.4.2 重组ASPV CP蛋白的纯化 | 第40页 |
| 1.4.3 重组ASPV CP重组蛋白的透析处理 | 第40-43页 |
| 1.5 ASPV单克隆抗体的制备 | 第43-46页 |
| 1.5.1 小鼠免疫 | 第43页 |
| 1.5.2 免疫脾细胞的制备,细胞融合及筛选培养 | 第43-44页 |
| 1.5.3 杂交瘤细胞的单克隆筛选和克隆 | 第44页 |
| 1.5.4 杂交瘤细胞株的冻存和复苏 | 第44页 |
| 1.5.5 腹水抗体的制备及纯化 | 第44-45页 |
| 1.5.6 间接ELISA法测定单抗腹水效价 | 第45页 |
| 1.5.7 单克隆抗体的类型及亚类鉴定 | 第45-46页 |
| 1.6 ASPV多克隆抗体的制备 | 第46页 |
| 1.7 血清学检测方法的建立 | 第46-50页 |
| 1.7.1 ACP ELISA方法的建立 | 第46-47页 |
| 1.7.2 TAS-ELISA方法的建立 | 第47-48页 |
| 1.7.3 DAS-ELISA检测方法的建立 | 第48-49页 |
| 1.7.4 dot-ELISA检测方法的建立 | 第49-50页 |
| 1.8 建立的血清学方法的田间检测应用 | 第50-51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-60页 |
| 2.1 ASPV CP蛋白的原核表达和纯化 | 第51-52页 |
| 2.2 ASPV单克隆抗体制备、抗体类型和亚类鉴定、效价测定 | 第52-53页 |
| 2.3 Westem blot检测ASPV单抗的特异性 | 第53-54页 |
| 2.4 ACP-ELISA方法的建立及单抗特异性分析 | 第54页 |
| 2.5 DAS-ELISA方法的建立及其特异性和灵敏度 | 第54-56页 |
| 2.5.1 检测梨树中ASPV的DAS-ELISA方法的建立与特异性分析 | 第54-55页 |
| 2.5.2 DAS-ELISA方法检测梨树病叶中ASPV的灵敏度分析 | 第55-56页 |
| 2.6 TAS-ELISA方法的建立及其特异性和灵敏度 | 第56-58页 |
| 2.6.1 检测梨树中ASPV的TAS-ELISA方法的建立与特异性分析 | 第56-57页 |
| 2.6.2 检测梨树中ASPV的TAS-ELISA方法的灵敏度分析 | 第57-58页 |
| 2.7 dot-ELISA方法的建立及其特异性和灵敏度 | 第58-59页 |
| 2.7.1 检测梨树中ASPV的dot-ELISA方法的建立与特异性分析 | 第58-59页 |
| 2.7.2 检测梨树中ASPV的dot-ELISA方法的灵敏度分析 | 第59页 |
| 2.8 血清学方法的果园应用 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 第三章 苹果茎沟病毒单克隆抗体的制备及其检测应用 | 第62-76页 |
| 1 材料与方法 | 第62-64页 |
| 1.1 病毒材料 | 第62页 |
| 1.2 生化试剂 | 第62页 |
| 1.3 ASGV CP蛋白的原核表达和纯化 | 第62-63页 |
| 1.4 ASGV单克隆抗体和多克隆抗体的制备 | 第63页 |
| 1.5 ASGV血清学方法的建立 | 第63页 |
| 1.6 检测ASGV的RT-PCR方法 | 第63-64页 |
| 1.7 血清学方法检测果园中的ASGV | 第64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-73页 |
| 2.1 ASGV抗原的制备 | 第64-66页 |
| 2.2 分泌ASGV单克隆抗体的杂交瘤细胞及其腹水单抗的制备 | 第66页 |
| 2.3 Western blot分析ASGV单抗的特异性 | 第66-67页 |
| 2.4 ACP-ELISA分析ASGV单抗方法的建立及特异性分析 | 第67-68页 |
| 2.5 检测ASGV的TAS-ELISA方法 | 第68-70页 |
| 2.5.1 检测不同寄主中ASGV的TAS-ELISA方法的建立和特异性分析 | 第68-69页 |
| 2.5.2 检测不同寄主中ASGV的TAS-ELISA方法的灵敏度分析 | 第69-70页 |
| 2.6 检测ASGV dot-ELISA方法的建立及其特异性和灵敏度分析 | 第70-72页 |
| 2.6.1 检测不同寄主中ASGV的dot-ELISA方法的建立和特异性分析 | 第70-71页 |
| 2.6.2 检测不同寄主中ASGV的dot-ELISA方法的灵敏度分析 | 第71-72页 |
| 2.7 血清学方法和RT-PCR检测果园中的ASGV | 第72-73页 |
| 3 讨论 | 第73-76页 |
| 全文总结 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-89页 |
| 附录A 本论文中所用病毒名称及缩写 | 第89-90页 |
| 附录B 生化试剂及分子生物学试剂 | 第90-91页 |
| 附录C 常用试剂提取配方及缓冲液、培养基配方 | 第91-93页 |
