| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-21页 |
| 1 PEDV概述 | 第12-17页 |
| 1.1 PED简介 | 第12页 |
| 1.2 PEDV研究概况 | 第12-15页 |
| 1.3 PED 的防治情况 | 第15-17页 |
| 2 GRFT概述 | 第17-21页 |
| 2.1 GRFT蛋白简介 | 第17-18页 |
| 2.2 GRFT蛋白优点 | 第18页 |
| 2.3 GRFT蛋白的研究概况 | 第18-21页 |
| 第二章 研究方案设计 | 第21-23页 |
| 1 研究目的与意义 | 第21页 |
| 2 研究内容 | 第21-22页 |
| 3 技术路线 | 第22-23页 |
| 第三章 GRFT基因的合成及其重组蛋白的原核表达、纯化 | 第23-34页 |
| 1 实验材料、试剂与仪器 | 第23-26页 |
| 1.1 实验材料 | 第23页 |
| 1.2 实验试剂 | 第23-26页 |
| 1.3 主要仪器 | 第26页 |
| 2 实验方法 | 第26-31页 |
| 2.1 GRFT的全基因合成 | 第26页 |
| 2.2 重组表达载体pET28a-SUMO-GRFT的构建 | 第26-28页 |
| 2.3 重组GRFT蛋白的诱导表达与纯化 | 第28-31页 |
| 3 实验结果 | 第31-33页 |
| 3.1 重组表达载体pET28a-SUMO-GRFT的双酶切鉴定 | 第31页 |
| 3.2 重组表达载体pET28a-SUMO-GRFT的诱导表达与纯化 | 第31-32页 |
| 3.3 重组GRFT蛋白的Westernblotting检测 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-34页 |
| 第四章 Vero细胞复苏培养及重组GRFT蛋白的抗病毒效果分析 | 第34-43页 |
| 1 实验材料、试剂与仪器 | 第34页 |
| 1.1 实验材料 | 第34页 |
| 1.2 主要试剂 | 第34页 |
| 1.3 实验仪器 | 第34页 |
| 2 实验方法 | 第34-38页 |
| 2.1 Vero细胞的复苏及贴壁培养 | 第34-35页 |
| 2.2 PEDV扩增及滴度测定 | 第35-36页 |
| 2.3 重组GRFT蛋白对PEDV的抗病毒效果检测 | 第36-37页 |
| 2.4 PEDV的去糖基化处理 | 第37-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-41页 |
| 3.1 GRFT蛋白对Vero细胞的保护效果 | 第38-39页 |
| 3.2 用空斑法检测GRFT的抗病毒效果 | 第39-41页 |
| 3.3 PEDV的去糖基化处理 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第五章 重组GRFT蛋白的稳定性分析 | 第43-56页 |
| 1 实验材料、试剂与仪器 | 第43页 |
| 1.1 实验材料与仪器 | 第43页 |
| 1.2 实验试剂 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-46页 |
| 2.1 重组GRFT蛋白的热处理实验 | 第43-44页 |
| 2.2 重组GRFT蛋白的酸浴实验 | 第44页 |
| 2.3 重组GRFT蛋白的胰蛋白酶消化实验 | 第44-45页 |
| 2.4 重组GRFT蛋白的胃蛋白酶消化实验 | 第45页 |
| 2.5 重组GRFT蛋白的存储实验 | 第45-46页 |
| 3 实验结果 | 第46-54页 |
| 3.1 重组GRFT蛋白热处理后耐受性分析 | 第46-48页 |
| 3.2 重组GRFT蛋白酸处理后耐受性分析 | 第48-50页 |
| 3.3 重组GRFT蛋白胰蛋白酶消化后的耐受性分析 | 第50-51页 |
| 3.4 重组GRFT蛋白的胃蛋白酶消化耐受性分析 | 第51-53页 |
| 3.5 重组GRFT蛋白的存储稳定性 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
