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陆地棉类膨胀素基因的克隆与功能初步研究

摘要第7-9页
ABSTRACT第9-10页
缩略语表第11-12页
1 文献综述第12-31页
    1.1 植物细胞壁研究进展第12-18页
        1.1.1 植物细胞壁的成分第12-15页
        1.1.2 植物细胞壁的结构第15-16页
        1.1.3 植物细胞壁的形成第16-17页
        1.1.4 植物细胞壁的功能第17-18页
    1.2 植物膨胀素研究进展第18-30页
        1.2.1 植物膨胀素的结构第19页
        1.2.2 植物膨胀素的分类第19-21页
        1.2.3 膨胀素活性特征及生物化学特性第21-22页
        1.2.4 植物膨胀素的功能第22-27页
        1.2.5 植物膨胀素基因的表达第27-29页
        1.2.6 膨胀素作用机理第29-30页
    1.3 木研究的目的与意义第30-31页
2 陆地棉类膨胀素基因的克隆及表达分析第31-53页
    2.1 材料试剂第31-32页
        2.1.1 实验材料第31页
        2.1.2 实验试剂第31-32页
    2.2 实验方法第32-41页
        2.2.1 总RNA提取、纯化和第一链cDNA合成第32页
        2.2.2 陆地棉类膨胀素基因的克隆第32-37页
        2.2.3 陆地棉类膨胀素基因的序列分析第37页
        2.2.4 陆地棉类膨胀素基因表达分析第37-41页
    2.3 结果第41-50页
        2.3.1 陆地棉类膨胀基因的克隆第41页
        2.3.2 陆地棉类膨胀素基因的序列分析第41-49页
        2.3.3 陆地棉类膨胀素基因的表达分析第49-50页
    2.4 讨论第50-53页
        2.4.1 利用RACE技术克隆类膨胀素基因的可行性第50-51页
        2.4.2 陆地棉类膨胀素基因是一个多基因亚家族第51页
        2.4.3 本研究克隆的基因属于膨胀素基因家族类膨胀素亚族第51-52页
        2.4.4 陆地棉类膨胀素基因的表达第52-53页
3 根癌农杆菌介导类膨胀素基因转化陆地棉研究第53-78页
    3.1 材料试剂第54-55页
        3.1.1 植物材料第54页
        3.1.2 菌株与载体第54页
        3.1.3 实验试剂第54-55页
    3.2 试验方法第55-67页
        3.2.1 陆地棉类膨胀素基因RNA干涉表达载体构建第55-58页
        3.2.2 陆地棉类膨胀素基因超量表达载体构建第58-60页
        3.2.3 电转化法转化农杆菌EHA105第60-61页
        3.2.4 类膨胀素基因转化YZ1下胚轴及转基因检测第61-64页
        3.2.5 类膨胀素转化C201胚性愈伤及转基因检测第64-65页
        3.2.6 转基因T0植株细胞学分析第65-66页
        3.2.7 转基因原生质体再生细胞壁分析第66-67页
    3.3 结果第67-76页
        3.3.1 转基因载体PCR检测第67页
        3.3.2 转基因植株(单细胞系)PCR检测第67-68页
        3.3.3 转基因植株(单细胞系)表达分析第68-70页
        3.3.4 转基因阳性单株Southern blot分析第70-71页
        3.3.5 转基因植株组织切片分析第71-74页
        3.3.6 转基因单细胞系再生细胞壁分析第74-76页
    3.4 讨论第76-78页
        3.4.1 类膨胀素基因影响转基因植株(单细胞)及单细胞系细胞壁的再生第76-78页
参考文献第78-84页
附录第84-98页
    附录1 改良的异硫氰酸胍法提取总RNA、去基因组DNA和纯化第84-85页
    附录2 第一链cDNA合成程序第85页
    附录3 RACE-Ready cDNA制备程序第85-86页
    附录4 琼脂糖凝胶DNA回收程序第86-87页
    附录5 大肠杆菌感受态细胞的制备第87-88页
    附录6 PCR产物回收第88-89页
    附录7 质粒提取步骤第89-90页
    附录8 农杆菌EHA105感受态制备第90-91页
    附录9 棉花组织培养所用培养基和培养条件第91页
    附录10 棉花基因组DNA提取程序(大量法)第91-93页
    附录11 Southern blot程序第93-95页
    附录12 组织石蜡切片制作过程第95-97页
    附录13 陆地棉愈伤分离原生质体及再生细胞壁培养第97-98页
致谢第98页

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