重组毕赤酵母产壳聚糖酶发酵工艺优化
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1. 前言 | 第10-23页 |
| 1.1 壳聚糖与壳寡糖 | 第10-12页 |
| 1.2 壳聚糖酶 | 第12-16页 |
| 1.2.1 壳聚糖酶的来源与分类 | 第12-13页 |
| 1.2.2 壳聚糖酶的理化性质 | 第13-14页 |
| 1.2.3 壳聚糖酶的分子生物学特性 | 第14-15页 |
| 1.2.4 壳聚糖酶的研究现状及开发前景 | 第15-16页 |
| 1.3 毕赤酵母高密度发酵 | 第16-22页 |
| 1.3.1 毕赤酵母表达系统 | 第16-17页 |
| 1.3.2 毕赤酵母表达外源蛋白的影响因素 | 第17-19页 |
| 1.3.3 毕赤酵母高密度发酵碳源流加策略 | 第19-21页 |
| 1.3.4 毕赤酵母高密度发酵方式 | 第21-22页 |
| 1.4 本课题的研究目的及意义 | 第22-23页 |
| 2. 材料与方法 | 第23-35页 |
| 2.1 材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 培养基和溶液 | 第23-24页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.2 方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 菌种保藏与活化 | 第25页 |
| 2.2.1.1 菌种的保藏 | 第25页 |
| 2.2.1.2 菌种的活化 | 第25页 |
| 2.2.2 检测方法 | 第25-28页 |
| 2.2.2.1 生物量的测定 | 第25-26页 |
| 2.2.2.2 壳聚糖酶酶活的测定 | 第26-27页 |
| 2.2.2.2.1 氨基葡萄糖标准曲线 | 第26页 |
| 2.2.2.2.2 壳聚糖酶酶活的测定 | 第26-27页 |
| 2.2.2.3 蛋白浓度的测定 | 第27-28页 |
| 2.2.3 菌株的生长特性 | 第28-29页 |
| 2.2.3.1 种子液生长曲线 | 第28页 |
| 2.2.3.2 甲醇耐受性检测 | 第28-29页 |
| 2.2.3.3 甲醇低温诱导试验 | 第29页 |
| 2.2.4 高密度发酵工艺优化 | 第29-33页 |
| 2.2.4.1 高密度发酵基本操作步骤 | 第29-31页 |
| 2.2.4.2 甘油流加方式比较 | 第31页 |
| 2.2.4.3 诱导初期菌体湿重对产酶影响 | 第31-32页 |
| 2.2.4.4 甲醇流加方式对产酶影响 | 第32页 |
| 2.2.4.5 甲醇低温诱导对产酶影响 | 第32-33页 |
| 2.2.5 发酵液的预处理 | 第33页 |
| 2.2.6 壳聚糖酶喷雾干燥工艺优化 | 第33-34页 |
| 2.2.6.1 喷雾干燥蛋白保护剂的选择 | 第33页 |
| 2.2.6.2 喷雾干燥条件正交实验 | 第33-34页 |
| 2.2.7 壳聚糖酶耐贮藏性研究 | 第34-35页 |
| 3. 结果与分析 | 第35-51页 |
| 3.1 菌株的生长特性 | 第35-39页 |
| 3.1.1 种子液生长曲线 | 第35-36页 |
| 3.1.2 甲醇耐受性检测 | 第36-37页 |
| 3.1.3 甲醇低温诱导试验 | 第37-39页 |
| 3.2 高密度发酵工艺优化 | 第39-47页 |
| 3.2.1 甘油流加法比较 | 第39-41页 |
| 3.2.2 诱导初期菌体湿重对产酶影响 | 第41-43页 |
| 3.2.3 甲醇流加方式对产酶影响 | 第43-45页 |
| 3.2.4 甲醇低温诱导对产酶影响 | 第45-47页 |
| 3.3 壳聚糖酶喷雾干燥工艺优化 | 第47-50页 |
| 3.3.1 喷雾干燥蛋白保护剂的选择 | 第47-48页 |
| 3.3.2 喷雾干燥条件优化 | 第48-50页 |
| 3.4 壳聚糖酶耐贮藏性研究 | 第50-51页 |
| 4. 小结与讨论 | 第51-55页 |
| 4.1 摇瓶无机盐培养基和接种量优化 | 第51页 |
| 4.2 发酵罐搅拌转速 | 第51-52页 |
| 4.3 发酵工艺参数优化 | 第52-54页 |
| 4.3.1 提高开始诱导时菌体湿重 | 第52-53页 |
| 4.3.2 甲醇浓度优化 | 第53页 |
| 4.3.3 降低诱导温度 | 第53-54页 |
| 4.4 喷雾干燥参数 | 第54-55页 |
| 4.4.1 蛋白保护剂的种类 | 第54页 |
| 4.4.2 喷雾干燥条件选择范围 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
