| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第12-23页 |
| 1 白藜芦醇 | 第12-19页 |
| 1.1 白藜芦醇简介 | 第12页 |
| 1.2 白藜芦醇的结构及特征 | 第12页 |
| 1.3 白藜芦醇的分布 | 第12页 |
| 1.4 白藜芦醇的合成 | 第12-14页 |
| 1.4.1 白藜芦醇的生物合成 | 第13页 |
| 1.4.2 白藜芦醇的化学合成 | 第13-14页 |
| 1.5 白藜芦醇的生理活性 | 第14-17页 |
| 1.5.1 抗氧化、抗自由基 | 第14页 |
| 1.5.2 防治心血管疾病 | 第14-16页 |
| 1.5.3 抗肿瘤、抗癌 | 第16页 |
| 1.5.4 保护肝脏 | 第16页 |
| 1.5.5 抗衰老、延寿 | 第16-17页 |
| 1.6 白藜芦醇的植物抗病性 | 第17页 |
| 1.7 白藜芦醇提取及含量测定 | 第17-18页 |
| 1.7.1 白藜芦醇的提取 | 第17-18页 |
| 1.7.2 白藜芦醇的含量测定 | 第18页 |
| 1.8 白藜芦醇合酶基因(RS基因) | 第18-19页 |
| 1.8.1 克隆的部分植物白藜芦醇合酶序列 | 第18页 |
| 1.8.2 白藜芦醇合酶的转基因研究 | 第18-19页 |
| 2 启动子 | 第19-20页 |
| 2.1 启动子的含义和结构 | 第19页 |
| 2.2 植物启动子的分类 | 第19-20页 |
| 2.2.1 组成型启动子 | 第19页 |
| 2.2.2 诱导型启动子 | 第19页 |
| 2.2.3 组织特异型启动子 | 第19-20页 |
| 3 发根农杆菌 | 第20页 |
| 3.1 发根农杆菌简介 | 第20页 |
| 3.2 发根农杆菌的研究与应用 | 第20页 |
| 3.3 存在的问题 | 第20页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 5 本研究的技术路线 | 第21-23页 |
| 第二章 花生各组织器官中白藜芦醇的提取和检测 | 第23-29页 |
| 1 引言 | 第23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.2 实验仪器与试剂 | 第23页 |
| 2.3 色谱条件 | 第23页 |
| 2.4 实验方法 | 第23-24页 |
| 2.4.1 白藜芦醇标准品储备液的制备 | 第23页 |
| 2.4.2 白藜芦醇标准工作液的制备 | 第23-24页 |
| 2.4.3 原料预处理 | 第24页 |
| 2.4.4 标准曲线的绘制 | 第24页 |
| 2.4.5 精密度实验 | 第24页 |
| 2.4.6 稳定性实验 | 第24页 |
| 2.4.7 重现性实验 | 第24页 |
| 2.4.8 闽花6号花生三叶期各组织器官中白藜芦醇含量的测定 | 第24页 |
| 3 结果分析 | 第24-27页 |
| 3.0 RP-HPLC色谱分析 | 第24-25页 |
| 3.1 标准曲线的绘制 | 第25-26页 |
| 3.2 精密度实验 | 第26页 |
| 3.3 稳定性实验 | 第26-27页 |
| 3.4 重现性实验 | 第27页 |
| 3.5 闽花6号花生三叶期各组织器官中白藜芦醇含量的测定 | 第27页 |
| 4 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 烟草根茎特异启动子NtR12的克隆及序列分析 | 第29-38页 |
| 1 引言 | 第29页 |
| 2 材料和方法 | 第29-32页 |
| 2.1 材料制备 | 第29页 |
| 2.2 试验方法 | 第29-32页 |
| 2.2.1 烟草DNA的提取(CTAB法) | 第29页 |
| 2.2.2 PCR扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.3 目的片段的回收 | 第30页 |
| 2.2.4 回收的目的片断与pMD18-T Vector的连接 | 第30页 |
| 2.2.5 目的片段的克隆与测序 | 第30-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-37页 |
| 3.1 烟草DNA提取结果 | 第32页 |
| 3.2 PCR扩增获得了目的片段 | 第32-35页 |
| 3.3 NtR12启动子序列的结构功能分析 | 第35-37页 |
| 4 讨论 | 第37-38页 |
| 第四章 根(或含茎)特异表达载体构建 | 第38-50页 |
| 1 引言 | 第38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第38页 |
| 2.2 实验方法 | 第38-43页 |
| 2.2.1 pBI121-NtR12-GUSA载体构建 | 第38-41页 |
| 2.2.2 pBI121-NtR12-RS载体构建 | 第41-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-48页 |
| 3.1 成功构建了载体pBI121-NtR12-GUSA及pBI121-NtR12-RS | 第43-46页 |
| 3.1.1 pBI121-NtR12-GUSA载体及pBI121A-B_1-RS载体的质粒提取 | 第43页 |
| 3.1.2 质粒的酶切反应 | 第43-45页 |
| 3.1.3 重组质粒的PCR检测 | 第45-46页 |
| 3.1.4 重组质粒pBl121-NtR12-RS的单、双酶切验证 | 第46页 |
| 3.1.5 pBI121-NtR12-RS表达载体测序结果分析 | 第46页 |
| 3.2 各植物表达载体构建流程图 | 第46-47页 |
| 3.3 载体测序及序列分析 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 花生白藜芦醇合酶基因遗传转化烟草 | 第50-66页 |
| 1 引言 | 第50页 |
| 2 材料与方法 | 第50-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第50页 |
| 2.2 实验方法 | 第50-54页 |
| 2.2.1 pBI121-GUSA载体质粒转化农杆菌 | 第50-51页 |
| 2.2.2 对本生烟草遗传转化的Kan筛选浓度的确定(农杆菌介导的叶盘法) | 第51-52页 |
| 2.2.3 根(或含茎)特异表达载体质粒转化农杆菌 | 第52-53页 |
| 2.2.4 烟草遗传转化 | 第53-54页 |
| 2.2.5 转基因烟草的分子检测 | 第54页 |
| 3 结果分析 | 第54-64页 |
| 3.1 载体质粒转化农杆菌 | 第54-55页 |
| 3.2 优化了本生烟草Kan筛选浓度 | 第55-57页 |
| 3.3 烟草遗传转化获得了转基因材料 | 第57-63页 |
| 3.3.1 转不同重组质粒的本生烟草的长势情况 | 第57-58页 |
| 3.3.2 本生烟草转基因苗的生根培养 | 第58-61页 |
| 3.3.3 转不同重组质粒的CB-1烟草的长势情况 | 第61-63页 |
| 3.4 转基因植株的白藜芦醇表达分析 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 第六章 发根农杆菌实现转白藜芦醇合酶基因烟草大量发根 | 第66-82页 |
| 1 引言 | 第66页 |
| 2 材料和方法 | 第66-68页 |
| 2.1 实验材料 | 第66页 |
| 2.2 实验方法 | 第66-68页 |
| 2.2.1 工程菌的制备 | 第66页 |
| 2.2.2 发根农杆菌介导转化烟草CB-1和本生烟草无菌苗 | 第66-67页 |
| 2.2.3 两种烟草无菌苗毛状根的液体培养 | 第67页 |
| 2.2.4 发根农杆菌介导转化本生烟草及CB-1烟草转基因苗 | 第67页 |
| 2.2.5 分子检测 | 第67-68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-80页 |
| 3.1 发根农杆菌转化本生烟草及CB-1烟草的培养条件优化 | 第68-79页 |
| 3.2 两种烟草无菌苗毛状根的液体培养 | 第79-80页 |
| 3.3 发根农杆菌介导转化本生烟草及CB-1烟草转基因苗 | 第80页 |
| 3.4 发根农杆菌介导转化本生烟草和CB-1烟草转基因苗的目的基因表达 | 第80页 |
| 4 讨论 | 第80-82页 |
| 第七章 结论与展望 | 第82-84页 |
| 1 结论 | 第82-83页 |
| 2 展望 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| 致谢 | 第92页 |
