| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩略词及注解 | 第6-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-26页 |
| 1.1 氨基糖类抗生素 | 第10-15页 |
| 1.1.1 氨基糖苷类抗生素简介 | 第10-12页 |
| 1.1.2 氨基糖苷类抗生素生物合成研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2 庆大霉素 | 第15-24页 |
| 1.2.1 庆大霉素简介 | 第15-17页 |
| 1.2.2 庆大霉素抗菌机制与毒副作用 | 第17页 |
| 1.2.3 庆大霉素生物合成途径的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2.4 庆大霉素生物合成基因簇的研究 | 第19页 |
| 1.2.5 庆大霉素生物合成基因的研究进展 | 第19-23页 |
| 1.2.6 庆大霉素分离提取的研究 | 第23页 |
| 1.2.7 庆大霉素检测的研究 | 第23-24页 |
| 1.3 选题依据与研究内容 | 第24-26页 |
| 1.3.1 选题依据 | 第24页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-30页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第26-27页 |
| 2.1.2 培养基 | 第27-28页 |
| 2.1.3 试剂 | 第28-30页 |
| 2.1.3.1 试剂与工具酶 | 第28页 |
| 2.1.3.2 抗生素及使用浓度 | 第28-29页 |
| 2.1.3.3 溶液与缓冲液 | 第29-30页 |
| 2.1.4 仪器与设备 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-38页 |
| 2.2.1 菌种培养与保藏 | 第30-31页 |
| 2.2.2 绛红色小单胞菌基因组DNA的提取 | 第31页 |
| 2.2.3 聚合酶链式反应(PCR) | 第31-32页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.2.5 DNA酶切反应 | 第33页 |
| 2.2.6 DNA片段回收 | 第33页 |
| 2.2.7 DNA酶连反应 | 第33-34页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| 2.2.9 质粒转化 | 第34页 |
| 2.2.10 碱裂解法提取质粒DNA | 第34-35页 |
| 2.2.11 大肠杆菌-小单胞菌接合转移 | 第35-36页 |
| 2.2.12 绛红色小单胞菌摇瓶发酵 | 第36页 |
| 2.2.13 抗生素效价测定 | 第36页 |
| 2.2.14 次级代谢产物的提取 | 第36-37页 |
| 2.2.14.1 732阳离子交换树脂的预处理 | 第37页 |
| 2.2.14.2 庆大霉素的提取 | 第37页 |
| 2.2.15 次级代谢产物分析 | 第37-38页 |
| 2.2.15.1 质谱法(MS) | 第37-38页 |
| 第三章 genT基因功能的研究 | 第38-46页 |
| 3.1 同源重组质粒pFT104的构建 | 第38-41页 |
| 3.1.1 绛红色小单胞菌G1008基因组的提取 | 第39页 |
| 3.1.2 同源交换臂的扩增 | 第39-40页 |
| 3.1.3 同源重组质粒pFT104的构建 | 第40-41页 |
| 3.2 genT基因缺失突变菌的筛选与验证 | 第41-43页 |
| 3.2.1 接合转移 | 第41-42页 |
| 3.2.2 单交换工程菌的鉴定 | 第42页 |
| 3.2.3 genT基因缺失突变菌的筛选 | 第42-43页 |
| 3.3 GT106稳定性分析 | 第43页 |
| 3.4 GT106次级代谢产物分析 | 第43-44页 |
| 3.5 小结 | 第44-46页 |
| 第四章 genN基因功能的研究 | 第46-54页 |
| 4.1 同源重组质粒pFTN203的构建 | 第46-48页 |
| 4.1.1 同源交换臂的扩增 | 第47页 |
| 4.1.2 同源重组质粒pFTN203的构建 | 第47-48页 |
| 4.2 genN基因缺失突变菌的筛选与验证 | 第48-50页 |
| 4.2.1 单交换工程菌的鉴定 | 第49页 |
| 4.2.2 genN基因缺失突变菌的筛选 | 第49-50页 |
| 4.3 突变菌GTNK308的筛选与验证 | 第50-51页 |
| 4.4 GTN205和GTNK308次级代谢产物分析 | 第51-52页 |
| 4.4.1 GTN205和GTNK308次级代谢产物MS分析 | 第51-52页 |
| 4.5 小结 | 第52-54页 |
| 第五章 genY基因功能的研究 | 第54-62页 |
| 5.1 同源重组质粒pFY303的构建 | 第54-57页 |
| 5.1.1 同源交换臂的扩增 | 第55-56页 |
| 5.1.2 同源重组质粒pFY303的构建 | 第56-57页 |
| 5.2 genY基因缺失突变菌的构建 | 第57-59页 |
| 5.2.1 单交换工程菌的鉴定 | 第57-58页 |
| 5.2.2 genY基因缺失突变菌的筛选与验证 | 第58-59页 |
| 5.2.3 突变菌GKY307的筛选与验证 | 第59页 |
| 5.3 突变菌GY305和GKY307次级代谢产物分析 | 第59-61页 |
| 5.4 小结 | 第61-62页 |
| 第六章 genB1基因功能的研究 | 第62-70页 |
| 6.1 同源重组质粒pFB1403的构建 | 第62-65页 |
| 6.1.1 同源交换臂的扩增 | 第63页 |
| 6.1.2 同源重组质粒pFB1403的构建 | 第63-65页 |
| 6.2 genB1基因缺失突变菌的筛选与验证 | 第65-67页 |
| 6.2.1 单交换工程菌的鉴定 | 第65页 |
| 6.2.2 genB1基因缺失突变菌的筛选 | 第65-66页 |
| 6.2.3 突变菌GKB1407的筛选与验证 | 第66-67页 |
| 6.3 突变菌GB1405和GKB1407代谢产物分析 | 第67-68页 |
| 6.4 小结 | 第68-70页 |
| 第七章 庆大霉素糖基转移酶基因的研究 | 第70-76页 |
| 7.1 同源重组质粒的构建 | 第70-72页 |
| 7.1.1 同源重组质粒pFM1503的构建 | 第71-72页 |
| 7.2 genM1基因阻断突变菌的筛选与验证 | 第72-73页 |
| 7.3 突变菌稳定性考察 | 第73-74页 |
| 7.4 突变菌GM1505代谢产物分析 | 第74-75页 |
| 7.5 小结 | 第75-76页 |
| 全文总结 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 附录 | 第84-87页 |
| 个人简历 | 第87页 |
