| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-24页 |
| 1.1 低温对植物的影响 | 第13-16页 |
| 1.1.1 低温对植物的伤害 | 第14-15页 |
| 1.1.2 植物低温的应答 | 第15-16页 |
| 1.2 植物MAPKKK的研究进展及作用机理 | 第16-19页 |
| 1.2.1 MAPKKK的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.2.2 MAPKKK家族的基因及蛋白结构特征 | 第17-18页 |
| 1.2.3 MAPK级联途径的作用 | 第18-19页 |
| 1.3 遗传转化的研究进展 | 第19-22页 |
| 1.3.1 遗传转化方法 | 第19-22页 |
| 1.4 研究内容和意义 | 第22页 |
| 1.5 本文研究的策略和方法 | 第22-24页 |
| 1.5.1 研究策略 | 第22-23页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第23-24页 |
| 第2章 Z-PKKK的克隆与序列分析 | 第24-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 菌种与载体 | 第24-25页 |
| 2.2 实验药品及试剂 | 第25-27页 |
| 2.2.1 培养基配制 | 第26页 |
| 2.2.2 实验试剂的配制 | 第26-27页 |
| 2.3 实验仪器 | 第27页 |
| 2.4 实验方法 | 第27-32页 |
| 2.4.1 米总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.4.2 cDNA的合成 | 第28页 |
| 2.4.3 克隆目的基因引物 | 第28页 |
| 2.4.4 PCR扩增及电泳检测 | 第28-29页 |
| 2.4.5 目的片段的回收 | 第29页 |
| 2.4.6 回收产物的平末端加A | 第29-30页 |
| 2.4.7 目的基因与克隆载体连接 | 第30页 |
| 2.4.8 大肠杆菌感受态的制备 | 第30页 |
| 2.4.9 连接产物的大肠杆菌转化 | 第30-31页 |
| 2.4.10 菌液PCR检测 | 第31页 |
| 2.4.11 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.4.12 重组质粒的PCR检测 | 第32页 |
| 2.4.13 质粒的酶切鉴定 | 第32页 |
| 2.4.14 生物信息学分析 | 第32页 |
| 2.5 实验结果 | 第32-37页 |
| 2.5.1 总RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.5.2 目的基因的克隆 | 第33页 |
| 2.5.3 目的基因的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.5.4 目的基因MAPKKK的结果分析 | 第34-37页 |
| 2.6 讨论 | 第37-38页 |
| 第3章 ZmPKKK的实时荧光定量PCR分析 | 第38-46页 |
| 3.1 实验材料 | 第38页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第38页 |
| 3.1.2 菌种与载体 | 第38页 |
| 3.2 实验药品及试剂 | 第38页 |
| 3.3 实验仪器 | 第38页 |
| 3.4 实验方法 | 第38-41页 |
| 3.4.1 米W9816的处理 | 第38-39页 |
| 3.4.2 米在不同胁迫下叶片的总RNA的提取 | 第39页 |
| 3.4.3 cDNA的合成 | 第39-40页 |
| 3.4.4 Real-time qRT-PCR引物的设计 | 第40页 |
| 3.4.5 qRT-PCR引物特异性的检测 | 第40页 |
| 3.4.6 Real-time qRT-PCR | 第40-41页 |
| 3.5 实验结果 | 第41-44页 |
| 3.5.1 引物特异性检测 | 第41页 |
| 3.5.2 Real-time qRT-PCR结果 | 第41-44页 |
| 3.6 讨论 | 第44-46页 |
| 第4章 植物过表达载体及干扰载体的构建 | 第46-61页 |
| 4.1 植物过表达载体构建 | 第46-50页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第46页 |
| 4.1.2 实验药品及试剂 | 第46页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第46-47页 |
| 4.1.4 实验方法 | 第47-49页 |
| 4.1.5 实验结果 | 第49-50页 |
| 4.2 植物干扰载体构建 | 第50-61页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第50页 |
| 4.2.2 实验药品及试剂 | 第50-51页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第51页 |
| 4.2.4 实验方法 | 第51-56页 |
| 4.2.5 实验结果 | 第56-59页 |
| 4.2.6 讨论 | 第59-61页 |
| 第5章 ZmPKKK在拟南芥中的转化及功能分析 | 第61-72页 |
| 5.1 实验材料 | 第61页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第61页 |
| 5.1.2 菌种与载体 | 第61页 |
| 5.2 实验药品及试剂 | 第61-62页 |
| 5.2.1 培养基配制 | 第61页 |
| 5.2.2 实验试剂的配制 | 第61-62页 |
| 5.3 实验仪器 | 第62页 |
| 5.4 实验方法 | 第62-64页 |
| 5.4.1 农杆菌阳性菌落的鉴定 | 第62页 |
| 5.4.2 拟南芥遗传转化 | 第62-63页 |
| 5.4.3 转基因拟南芥的筛选及鉴定 | 第63-64页 |
| 5.5 实验结果 | 第64-71页 |
| 5.5.1 农杆菌菌液检测 | 第64-65页 |
| 5.5.2 转目的基因拟南芥植株的筛选及检测 | 第65-67页 |
| 5.5.3 冷胁迫下转基因拟南芥的表型 | 第67-68页 |
| 5.5.4 干旱胁迫下转基因拟南芥的表型 | 第68页 |
| 5.5.5 高盐胁迫下转基因拟南芥的萌发率 | 第68-69页 |
| 5.5.6 冷胁迫下转基因拟南芥生理指标分析 | 第69-71页 |
| 5.6 讨论 | 第71-72页 |
| 第6章 Z-PKKK在玉米中的遗传转化研究 | 第72-84页 |
| 6.1 实验材料 | 第72页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第72页 |
| 6.1.2 菌种与载体 | 第72页 |
| 6.2 实验药品及试剂 | 第72-74页 |
| 6.2.1 培养基配制 | 第73页 |
| 6.2.2 实验试剂的配制 | 第73-74页 |
| 6.3 实验仪器 | 第74页 |
| 6.4 实验方法 | 第74-77页 |
| 6.4.1 农杆菌的培养 | 第74页 |
| 6.4.2 幼胚的准备 | 第74页 |
| 6.4.3 农杆菌介导转化幼胚 | 第74-75页 |
| 6.4.4 胚性愈伤的准备 | 第75页 |
| 6.4.5 农杆菌侵染胚性愈伤 | 第75-76页 |
| 6.4.6 提取玉米叶片DNA | 第76页 |
| 6.4.7 分子检测 | 第76-77页 |
| 6.5 实验结果 | 第77-82页 |
| 6.5.1 玉米DNA的提取 | 第77页 |
| 6.5.2 侵染玉米幼胚的分子检测 | 第77-79页 |
| 6.5.3 侵染幼胚的结果 | 第79页 |
| 6.5.4 侵染玉米胚性愈伤的分子检测 | 第79-80页 |
| 6.5.5 侵染胚性愈伤的结果 | 第80页 |
| 6.5.6 花粉管通道法获得抗性植株的分子检测 | 第80-82页 |
| 6.5.7 花粉管通道法转化结果 | 第82页 |
| 6.6 讨论 | 第82-84页 |
| 6.6.1 玉米愈伤组织的诱导 | 第82页 |
| 6.6.2 外植体的选择—玉米幼胚和胚性愈伤 | 第82-84页 |
| 全文结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-94页 |
| 作者简介 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95页 |