| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第1章 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 柠檬烯简介 | 第10-11页 |
| 1.2 植物中柠檬烯的合成 | 第11-16页 |
| 1.2.1 柠檬烯合成的前体途径 | 第12-14页 |
| 1.2.2 香叶基焦磷酸合酶(GPPS) | 第14-15页 |
| 1.2.3 (-)-柠檬烯合酶(LS) | 第15-16页 |
| 1.3 微生物中萜类化合物的异源合成 | 第16-17页 |
| 1.3.1 单萜的异源生物合成 | 第16-17页 |
| 1.3.2 二萜的异源生物合成 | 第17页 |
| 1.3.3 三萜的异源生物合成 | 第17页 |
| 1.4 本课题的主要内容和研究意义 | 第17-19页 |
| 1.4.1 主要研究意义 | 第17-18页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第18-19页 |
| 第2章 大肠杆菌中柠檬烯合成质粒的构建及优化 | 第19-39页 |
| 2.1 引言 | 第19页 |
| 2.2 实验材料 | 第19-22页 |
| 2.2.1 试剂 | 第19-20页 |
| 2.2.2 培养基 | 第20-21页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第21页 |
| 2.2.4 基因、质粒和菌株 | 第21-22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-34页 |
| 2.3.1 培养液大肠杆菌菌体浓度的测定 | 第22页 |
| 2.3.2 菌体干重和OD_(600)的关系 | 第22-23页 |
| 2.3.3 (-)-柠檬烯的鉴定和浓度测定 | 第23-24页 |
| 2.3.4 大肠杆菌基因组DNA的提取 | 第24页 |
| 2.3.5 大肠杆菌中质粒的提取 | 第24页 |
| 2.3.6 PCR反应条件 | 第24-26页 |
| 2.3.7 限制性核酸内切酶酶切以及T4 DNA连接酶连接 | 第26-28页 |
| 2.3.8 ls-gpps串联片段的构建 | 第28-29页 |
| 2.3.9 gpps-ls串联片段的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.10 ls-Ecgpps串联片段的构建 | 第30-32页 |
| 2.3.11 Ecgpps-ls串联片段的构建 | 第32-33页 |
| 2.3.12 柠檬烯合成途径质粒的构建以及基因工程E.coli菌株的构建 | 第33页 |
| 2.3.13 大肠杆菌工程菌株生物量和柠檬烯合成能力的测定 | 第33-34页 |
| 2.4 结果和分析 | 第34-38页 |
| 2.4.1 柠檬烯合成质粒的构建 | 第34-35页 |
| 2.4.2 柠檬烯合成途径质粒的构建 | 第35页 |
| 2.4.3 最优合成柠檬烯重组E.coli的筛选 | 第35-36页 |
| 2.4.4 合成柠檬烯重组E.coli的生长量的比较 | 第36-38页 |
| 2.5 本章小结 | 第38-39页 |
| 第3章 大肠杆菌自身MEP途径的强化 | 第39-53页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 实验材料 | 第39-42页 |
| 3.2.1 试剂 | 第39-40页 |
| 3.2.2 培养基 | 第40-41页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第41页 |
| 3.2.4 基因、质粒及菌株 | 第41-42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-48页 |
| 3.3.1 大肠杆菌基因组和质粒的提取 | 第42页 |
| 3.3.2 PCR反应条件 | 第42-43页 |
| 3.3.3 限制性核酸内切酶酶切以及T4 DNA连接酶连接 | 第43-45页 |
| 3.3.4 dxs-idi串联片段的构建 | 第45-46页 |
| 3.3.5 MEP途径改造质粒的构建 | 第46-47页 |
| 3.3.6 共表达菌株的构建 | 第47-48页 |
| 3.3.7 E.coli工程菌株生长和柠檬烯合成能力的测定 | 第48页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第48-51页 |
| 3.4.1 dxs-idi串联片段的构建 | 第48页 |
| 3.4.2 MEP途径质粒的构建 | 第48页 |
| 3.4.3 最优合成柠檬烯重组E.coli的筛选 | 第48-51页 |
| 3.4.4 合成柠檬烯重组E.coli的生长量的比较 | 第51页 |
| 3.5 小结 | 第51-53页 |
| 第4章 大肠杆菌两相培养系统的优化 | 第53-64页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 实验材料 | 第53-55页 |
| 4.2.1 试剂 | 第53-54页 |
| 4.2.2 培养基 | 第54-55页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第55页 |
| 4.2.4 质粒及菌株 | 第55页 |
| 4.3 实验方法 | 第55-57页 |
| 4.3.1 两相培养体系内正十六烷体积的优化 | 第55-56页 |
| 4.3.2 基础培养基的选择 | 第56页 |
| 4.3.3 基础培养基内组分的优化 | 第56-57页 |
| 4.4 结果和分析 | 第57-63页 |
| 4.4.1 两相培养体系内正十六烷体积的优化 | 第57-58页 |
| 4.4.2 基础培养基的选择 | 第58-60页 |
| 4.4.3 基础培养基内组分的优化 | 第60-63页 |
| 4.5 本章小结 | 第63-64页 |
| 结论和展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 附录 | 第72-76页 |
| 攻读硕士期间撰写的论文 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
