| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| CHAPTER 1 Introduction | 第11-24页 |
| 1.1 Parkinson’s disease | 第11-13页 |
| 1.2 α-Synuclein | 第13-17页 |
| 1.2.1 Lewy bodies | 第13页 |
| 1.2.2 α-Synuclein gene mutations linked with inherited PD | 第13-14页 |
| 1.2.3 α-Synuclein structure | 第14-15页 |
| 1.2.4 α-Synuclein and cytotoxicity | 第15-17页 |
| 1.3 PINK 1 and Parkin | 第17-21页 |
| 1.3.1 PINK 1 | 第17-18页 |
| 1.3.2 PINK1 and Parkin mediate mitophagy of damaged mitochondria | 第18-20页 |
| 1.3.3 Mitophagy-independent functions of PINK1 | 第20-21页 |
| 1.4 Reactive oxygen species (ROS) | 第21页 |
| 1.5 Complex I | 第21-22页 |
| 1.6 Purpose and main content | 第22-24页 |
| 1.6.1 Overall aim | 第22页 |
| 1.6.2 Main research contents | 第22-24页 |
| CHAPTER 2 Materials and Methods | 第24-41页 |
| 2.1 Reagents and Equipment | 第24-25页 |
| 2.1.1 Reagents | 第24-25页 |
| 2.1.2 Equipment | 第25页 |
| 2.2 Methods | 第25-41页 |
| 2.2.1 Molecular cloning | 第25-31页 |
| 2.2.2 Calcium phosphate transfection | 第31-32页 |
| 2.2.3 Western Blotting | 第32-35页 |
| 2.2.4 Immunocytochemistry | 第35-36页 |
| 2.2.5 Virus Packaging | 第36页 |
| 2.2.6 Infection | 第36-37页 |
| 2.2.7 Flow cytometry | 第37-38页 |
| 2.2.8 Mitochondrial respiration (Extracellular Flux Analyzer) | 第38页 |
| 2.2.9 Protein extraction | 第38-40页 |
| 2.2.10 Transmission Electron Microscopy | 第40-41页 |
| CHAPTER 3 Results and Discussion | 第41-59页 |
| 3.1 Construction of retroviral vectors encoding A53T-αS | 第41页 |
| 3.2 Cell culture and transfection | 第41-42页 |
| 3.3 Confirmation of α-Synuclein expression by Western blot | 第42-43页 |
| 3.4 Packaging of PTY-CMV-A53T-Syn virus | 第43-44页 |
| 3.5 Infection of MEFs with PTY-CMV-A53T-Syn virus | 第44-45页 |
| 3.6 Detection of A53T-αS expression in virus-transduced WT andPINK1-deficient MEFs with immunocytochemistry | 第45-46页 |
| 3.7 Quantification of A53T-αS expression by flow cytometry | 第46-48页 |
| 3.8 Measurement of mitochondrial membrane potential (Δψm) with flowcytometry | 第48-49页 |
| 3.9 Measurement of Δψm and mitochondrial mass in the same cells withconfocal microscopy | 第49-50页 |
| 3.10 Oxidative stress in cytoplasm and mitochondrial matrix of WT andPINK1-deficient MEFs expressing A53T-αS | 第50-54页 |
| 3.10.1 Generation of recombinant retroviruses for expression of cytosolicand mitochondria-targeted ro GFP | 第50-52页 |
| 3.10.2 Transduction of WT and PINK1-deficient MEFs with Cyto-ro GFPand Matrix-ro GFP retroviruses | 第52-53页 |
| 3.10.3 Measurement of cytoplasmic and mitochondrial oxidative stress(ROS) in Ro-GFP retrovirus-transduced MEFs | 第53-54页 |
| 3.11 Measurement of mitochondrial respiration with extracellular fluxanalysis | 第54-56页 |
| 3.12 Electron microscopy analysis of mitochondrial morphology | 第56-57页 |
| 3.13 Quantification of detergent-soluble and insoluble αS | 第57-59页 |
| Conclusions | 第59-60页 |
| Discussion | 第60-63页 |
| References | 第63-71页 |
| Acknowledgement | 第71页 |
