| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-22页 |
| 1.1 课题来源及研究的目的和意义 | 第9页 |
| 1.2 Lnc RNA国内外研究进展 | 第9-16页 |
| 1.2.1 Lnc RNA的来源、结构与分类 | 第9-11页 |
| 1.2.2 Lnc RNA作用机制 | 第11-13页 |
| 1.2.3 Lnc RNA的功能 | 第13-16页 |
| 1.3 CRISPR/Cas9系统国内外研究进展 | 第16-20页 |
| 1.3.1 CRISPR系统的发现 | 第16-17页 |
| 1.3.2 CRISPR系统的分类 | 第17页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas9系统的结构与作用机制 | 第17-19页 |
| 1.3.4 CRISPR/Cas9的应用 | 第19-20页 |
| 1.4 研究内容及技术路线 | 第20-22页 |
| 1.4.1 主要研究内容 | 第20-21页 |
| 1.4.2 主要研究技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第22-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 实验所用动物、载体及细胞系 | 第22页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 实验仪器、引物及网站 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-36页 |
| 2.2.1 E9.5 天到E18.5 天胚胎、组织获取及固定包埋 | 第24-25页 |
| 2.2.2 RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.3 反转录 | 第26页 |
| 2.2.4 qRT-PCR及RT-PCR | 第26-27页 |
| 2.2.5 探针制备 | 第27-30页 |
| 2.2.6 原位杂交 | 第30-31页 |
| 2.2.7 DNA提取 | 第31-32页 |
| 2.2.8 针对Lnc-H13基因的g RNA设计步骤 | 第32-34页 |
| 2.2.9 细胞复苏、传代及冻存 | 第34-35页 |
| 2.2.10 细胞转染 | 第35-36页 |
| 第三章 Lnc RNA-H13在小鼠胚期表达谱分析 | 第36-47页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 生物信息学分析获得Lnc-H13基因及初步验证 | 第36-37页 |
| 3.3 原位杂交及定量分析Lnc-H13在小鼠胚胎发育期的表达 | 第37-44页 |
| 3.3.1 定量分析Lnc-H13在胚胎不同发育阶段的表达 | 第37-38页 |
| 3.3.2 探针合成 | 第38-39页 |
| 3.3.3 全胚胎原位杂交分析Lnc-H13在E10.5 天的表达 | 第39-40页 |
| 3.3.4 E12.5 切片原位杂交分析Lnc-H13表达 | 第40-41页 |
| 3.3.5 E15.5 切片原位杂交及定量分析Lnc-H13表达 | 第41-43页 |
| 3.3.6 定量分析不同发育阶段脑中Lnc-H13基因的表达 | 第43页 |
| 3.3.7 原位杂交分析出生后小鼠脑中Lnc-H13基因的表达 | 第43-44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-46页 |
| 3.5 本章小结 | 第46-47页 |
| 第四章 Lnc RNA-H13基因调控功能初探 | 第47-52页 |
| 4.1 引言 | 第47页 |
| 4.2 靶基因预测及细胞系筛选 | 第47-48页 |
| 4.3 CRISPR/Cas9敲除靶点设计及质粒构建 | 第48-49页 |
| 4.4 Lnc-H13基因敲除实验 | 第49-50页 |
| 4.5 靶基因表达水平检测 | 第50-51页 |
| 4.6 讨论 | 第51页 |
| 4.7 本章小结 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录 1 | 第59-60页 |
| 附录 2 | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 个人简历 | 第63页 |
