| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 绪论 | 第9-21页 |
| 1.1 课题来源及研究的目的和意义 | 第9-10页 |
| 1.2 小鼠Dlk1-Dio3印记区域研究进展 | 第10-12页 |
| 1.2.1 有关Dlk1-Dio3印记区域的介绍 | 第10-11页 |
| 1.2.2 有关Dlk1-Dio3印记区域内各基因的介绍 | 第11-12页 |
| 1.2.3 Dlk1-Dio3印记区域的调控作用 | 第12页 |
| 1.3 Dlk1-Dio3印记区域内差异甲基化位点的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.4 CRISPR/Cas9技术的研究现状 | 第15-18页 |
| 1.4.1 有关CRISPR/Cas9技术的原理介绍 | 第15-16页 |
| 1.4.2 有关CRISPR/Cas9技术的应用 | 第16-17页 |
| 1.4.3 关于CRISPR/Cas9技术的改造 | 第17-18页 |
| 1.5 本论文的研究内容及技术路线 | 第18-21页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第18-19页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第19-21页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第21-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验载体和细胞系 | 第21页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 实验仪器及常用网站和软件 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-30页 |
| 2.2.1 重组载体的构建、转化和阳性克隆筛选 | 第22-24页 |
| 2.2.2 细胞的复苏、传代及冻存 | 第24-25页 |
| 2.2.3 细胞转染 | 第25页 |
| 2.2.4 细胞系基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.5 细胞系基因组RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.6 基因组cDNA的获取 | 第27页 |
| 2.2.7 qRT-PCR分析 | 第27-29页 |
| 2.2.8 基因组DNA甲基化水平分析 | 第29-30页 |
| 第3章 Cas9载体构建和细胞系筛选 | 第30-35页 |
| 3.1 引言 | 第30页 |
| 3.2 利用生物信息学网站预测向导RNA | 第30-32页 |
| 3.3 基因敲除实验中Cas9重组质粒的构建 | 第32页 |
| 3.4 Dlk1-Dio3印记区域内基因在各个细胞系中表达情况筛选 | 第32-34页 |
| 3.5 讨论 | 第34页 |
| 3.6 本章小结 | 第34-35页 |
| 第4章 CGI-2 对Dlk1-Dio3印记区域内各基因表达调控的探究 | 第35-45页 |
| 4.1 引言 | 第35页 |
| 4.2 敲除N2a细胞中CGI-2 位点的预实验 | 第35-37页 |
| 4.3 敲除N2a细胞中差异甲基化区域CGI-2 | 第37-39页 |
| 4.4 敲除Hepa1-6 细胞CGI-2 区域 | 第39-41页 |
| 4.5 敲除NIH3T3细胞CGI-2 区域 | 第41-43页 |
| 4.6 讨论 | 第43-44页 |
| 4.7 本章小结 | 第44-45页 |
| 第5章 敲除CGI-2 后Dlk1-Dio3区域内差异甲基化位点甲基化状态检测 | 第45-51页 |
| 5.1 前言 | 第45页 |
| 5.2 检测Dlk1-DMR甲基化状态 | 第45-46页 |
| 5.3 检测Gtl2-DMR甲基化状态 | 第46-47页 |
| 5.4 检测CGI1DMR甲基化状态 | 第47-48页 |
| 5.5 检测IG-DMR甲基化状态 | 第48-49页 |
| 5.6 讨论 | 第49-50页 |
| 5.7 本章小结 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录Ⅰ | 第58-60页 |
| 附录Ⅱ | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
