| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 前言 | 第9-20页 |
| 1 氨酰-tRNA合成酶 | 第9-16页 |
| 1.1 氨酰-tRNA合成酶的催化性质 | 第9-10页 |
| 1.2 氨酰-tRNA合成酶的分类 | 第10-11页 |
| 1.3 氨酰-tRNA合成酶的进化 | 第11-14页 |
| 1.4 氨酰-tRNA合成酶的功能 | 第14-15页 |
| 1.5.氨酰-tRNA合成酶的应用前景 | 第15-16页 |
| 2 谷氨酰胺-tRNA合成酶 | 第16-17页 |
| 3 精氨酰-tRNA合成酶 | 第17-18页 |
| 4 谷氨酰胺-tRNA合成酶复合体 | 第18-20页 |
| 第二章 材料和方法 | 第20-28页 |
| 1 材料和试剂 | 第20-22页 |
| 1.1 菌种及载体 | 第20页 |
| 1.2 分子生物学试剂 | 第20页 |
| 1.3 主要实验试剂与配制 | 第20-22页 |
| 2 常用仪器设备 | 第22-23页 |
| 3 常用方法 | 第23-28页 |
| 3.1 PCR扩增 | 第23-24页 |
| 3.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第24页 |
| 3.3 PCR产物凝胶回收纯化 | 第24页 |
| 3.4 化学转化法制备Top10 感受态细胞 | 第24-25页 |
| 3.5 质粒DNA的提取 | 第25页 |
| 3.6 连接反应 | 第25-26页 |
| 3.7 重组DNA的转化及菌体复苏 | 第26页 |
| 3.8 重组质粒菌液PCR鉴定 | 第26页 |
| 3.9 酶切反应 | 第26-27页 |
| 3.10 SDS-PAGE电泳/凝胶的灌制 | 第27-28页 |
| 第三章 人谷氨酰胺-tRNA合成酶在大肠杆菌中的表达纯化及活性测定 | 第28-42页 |
| 1.材料与方法 | 第28-31页 |
| 1.1 材料 | 第28页 |
| 1.2 试剂 | 第28页 |
| 1.3 方法 | 第28-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-40页 |
| 2.1 人工合成谷氨酰胺-tRNA合成酶基因 | 第31-32页 |
| 2.2 谷氨酰胺-tRNA合成酶表达载体的构建 | 第32-34页 |
| 2.3 大肠杆菌表达谷氨酰胺-tRNA合成酶 | 第34页 |
| 2.4 谷氨酰胺-tRNA合成酶的分离纯化 | 第34-36页 |
| 2.5 谷氨酰胺-tRNA合成酶的活性测定 | 第36-37页 |
| 2.6 人工合成精氨酰-tRNA合成酶基因 | 第37-38页 |
| 2.7 精氨酰-tRNA合成酶表达载体构建 | 第38-40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 人GlnRS在家蚕BmN细胞表达 | 第42-50页 |
| 1 材料与方法 | 第42-46页 |
| 1.1 菌株与质粒 | 第42页 |
| 1.2 引物 | 第42页 |
| 1.3 所需要的培养基以及主要试剂 | 第42-43页 |
| 1.4 方法 | 第43-46页 |
| 1.4.1 谷氨酰胺-tRNA合成酶的基因克隆 | 第43页 |
| 1.4.2 谷氨酰胺-tRNA合成酶表达载体构建 | 第43页 |
| 1.4.3 重组Bacmid的构建 | 第43-44页 |
| 1.4.4 重组Bacmid DNA的提取及鉴定 | 第44-45页 |
| 1.4.5 重组Bacmid转染BmN昆虫细胞 | 第45-46页 |
| 1.4.6 GlnRS在BmN昆虫细胞中表达 | 第46页 |
| 2 结果 | 第46-49页 |
| 2.1 扩增谷氨酰胺-tRNA合成酶基因 | 第46页 |
| 2.2 重组质粒pFastBacTM-Dual-GlnRS鉴定 | 第46-47页 |
| 2.3 重组Bacmid DNA的鉴定 | 第47-48页 |
| 2.4 谷氨酰胺在BmN昆虫细胞中的表达 | 第48-49页 |
| 3.讨论 | 第49-50页 |
| 研究展望 | 第50-51页 |
| 小结 | 第51-52页 |
| 1 已取得的成果 | 第51页 |
| 2 有待进一步的探索 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-62页 |
| 研究生期间科研成果 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |