| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 水稻草状矮化病毒研究概况 | 第12-18页 |
| 1.1.1 病害的发生、分布 | 第12-13页 |
| 1.1.2 病毒的形态和特性 | 第13页 |
| 1.1.3 病毒与寄主 | 第13-14页 |
| 1.1.4 RGSV基因组结构及其功能 | 第14-17页 |
| 1.1.5 血清学 | 第17页 |
| 1.1.6 病害防治 | 第17-18页 |
| 1.2 翅型分化研究进展 | 第18-19页 |
| 1.2.1 植物病毒对蚜虫翅型分化的影响 | 第18-19页 |
| 1.2.2 褐飞虱翅型分化相关基因 | 第19页 |
| 1.3 本研究中用到的关键核心技术 | 第19-23页 |
| 1.3.1 荧光定量PCR技术 | 第19-21页 |
| 1.3.2 酵母双杂交技术 | 第21-23页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 褐飞虱无毒种群与感染RGSV种群翅型分化生物学统计 | 第25-31页 |
| 2.1 材料、试剂及仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.1 水稻病株与褐飞虱 | 第25页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第25页 |
| 2.1.4 RGSV检测引物 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-28页 |
| 2.2.1 褐飞虱成虫翅型统计 | 第26页 |
| 2.2.2 褐飞虱总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.3 反转录RT-PCR | 第27页 |
| 2.2.4 PCR反应 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-29页 |
| 2.3.1 翅型统计结果 | 第28-29页 |
| 2.3.2 PCR检测褐飞虱带毒率 | 第29页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 实时荧光定量qRT-PCR检测翅型分化相关基因的表达量 | 第31-39页 |
| 3.1 材料、试剂及仪器 | 第31-32页 |
| 3.1.1 水稻病株与褐飞虱 | 第31页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第31页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第31页 |
| 3.1.4 荧光定量PCR引物 | 第31-32页 |
| 3.2 方法 | 第32-33页 |
| 3.2.1 荧光定量PCR引物的筛选 | 第32-33页 |
| 3.2.2 基因标准曲线的绘制 | 第33页 |
| 3.2.3 实时荧光定量qRT-PCR检测褐飞虱翅型分化相关基因的表达量 | 第33页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第33-37页 |
| 3.3.1 目的基因及其内参基因的融解曲线 | 第33-35页 |
| 3.3.2 目的基因及其内参基因的标准曲线 | 第35-37页 |
| 3.3.3 褐飞虱翅型分化相关基因的表达量 | 第37页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 利用酵母双杂交系统研究flightin与RGSV各蛋白之间的互作情况 | 第39-48页 |
| 4.1 材料及试剂 | 第39页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第39页 |
| 4.1.2 引物设计 | 第39页 |
| 4.2 方法 | 第39-44页 |
| 4.2.1 目的基因酵母表达载体的构建 | 第39-42页 |
| 4.2.2 AH109酵母感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 4.2.3 重组质粒共转化酵母感受态细胞 | 第42-43页 |
| 4.2.4 蛋白互作的检测 | 第43-44页 |
| 4.3 结果与分析 | 第44-47页 |
| 4.3.1 PCR扩增目的基因 | 第44页 |
| 4.3.2 重组质粒的菌液PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 4.3.3 重组质粒的酶切鉴定 | 第45-46页 |
| 4.3.4 褐飞虱翅型分化相关基因flightin与RGSV病毒蛋白之间的互作检测 | 第46-47页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 亚细胞共定位验证flightin与RGSV-P1,P3,P5各蛋白之间的互作 | 第48-57页 |
| 5.1 材料、试剂及仪器 | 第48-49页 |
| 5.1.1 褐飞虱 | 第48页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第48页 |
| 5.1.3 仪器设备 | 第48页 |
| 5.1.4 引物设计 | 第48-49页 |
| 5.2 方法 | 第49-52页 |
| 5.2.1 目的基因pDONR221入门载体的构建 | 第49-50页 |
| 5.2.2 pEarly gate101、102瞬时表达载体的构建 | 第50页 |
| 5.2.3 重组质粒转化农杆菌 | 第50-52页 |
| 5.3 结果与分析 | 第52-57页 |
| 5.3.1 基因片段的扩增 | 第52页 |
| 5.3.2 基因与pDONR221入门载体的构建 | 第52-53页 |
| 5.3.3 pEarly gate101、102瞬时表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 5.3.4 亚细胞共定位 | 第54-57页 |
| 第六章 褐飞虱flightin基因多克隆抗体的制备及应用 | 第57-65页 |
| 6.1 材料、试剂及仪器 | 第57页 |
| 6.1.1 褐飞虱 | 第57页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第57页 |
| 6.1.3 仪器设备 | 第57页 |
| 6.2 方法 | 第57-60页 |
| 6.2.1 Flightin基因的克隆和原核表达载体的构建 | 第57-58页 |
| 6.2.2 Flightin蛋白的原核表达及可溶性分析 | 第58页 |
| 6.2.3 Flightin重组蛋白的多抗血清制备 | 第58-59页 |
| 6.2.4 Western blot检测 | 第59页 |
| 6.2.5 抗体效价检测 | 第59-60页 |
| 6.3 结果与分析 | 第60-63页 |
| 6.3.1 Flightin基因的克隆及原核表达载体pDEST17-flightin的构建 | 第60-61页 |
| 6.3.2 目的蛋白的诱导表达及可溶性分析 | 第61-62页 |
| 6.3.3 抗血清的制备及Western blot分析 | 第62-63页 |
| 6.3.4 Flightin抗体效价检测 | 第63页 |
| 6.4 讨论 | 第63-65页 |
| 第七章 总结与展望 | 第65-67页 |
| 7.1 总结 | 第65页 |
| 7.2 展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 附录一 常用培养基的配制 | 第74-77页 |
| 附录二 酵母培养基的配制 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
