| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第18-32页 |
| 1.1 前言 | 第18页 |
| 1.2 十字花科植物及其抗癌活性 | 第18-20页 |
| 1.2.1 十字花科植物 | 第18页 |
| 1.2.2 十字花科植物抗癌活性研究现状 | 第18-20页 |
| 1.3 莱菔素概述 | 第20-22页 |
| 1.3.1 莱菔子及莱菔素 | 第20-21页 |
| 1.3.2 莱菔素抗癌活性研究现状 | 第21页 |
| 1.3.3 莱菔素制备工艺研究现状 | 第21-22页 |
| 1.4 肝癌概述 | 第22-23页 |
| 1.4.1 肝癌的医学分类及诱导因素 | 第22-23页 |
| 1.4.2 肝癌的治疗手段研究现状 | 第23页 |
| 1.5 蛋白质组学概述 | 第23-26页 |
| 1.5.1 蛋白质组学 | 第23-24页 |
| 1.5.2 蛋白质组学技术分类及特点 | 第24-26页 |
| 1.6 细胞凋亡概述 | 第26-30页 |
| 1.6.1 细胞凋亡 | 第26-27页 |
| 1.6.2 细胞凋亡调控机制 | 第27-29页 |
| 1.6.3 失巢凋亡 | 第29页 |
| 1.6.4 失巢凋亡调控机制 | 第29-30页 |
| 1.7 立项背景及研究意义 | 第30-32页 |
| 1.7.1 立项背景 | 第30-31页 |
| 1.7.2 研究意义 | 第31-32页 |
| 第二章 莱菔素抑制肝癌细胞增殖并且诱导其凋亡 | 第32-42页 |
| 2.1 前言 | 第32页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第32-34页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 2.2.1.1 细胞系 | 第32页 |
| 2.2.1.2 实验耗材 | 第32-33页 |
| 2.2.1.3 实验试剂 | 第33页 |
| 2.2.1.4 主要实验试剂的配制 | 第33-34页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第34页 |
| 2.3 实验内容 | 第34-37页 |
| 2.3.1 肝癌细胞培养方法 | 第34-35页 |
| 2.3.2 MTT法测肝癌细胞生长曲线 | 第35-36页 |
| 2.3.3 流式细胞仪测肝癌细胞凋亡率 | 第36-37页 |
| 2.3.4 统计学分析 | 第37页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第37-41页 |
| 2.4.1 莱菔素抑制肝癌HepG2细胞生长 | 第37-38页 |
| 2.4.2 莱菔素抑制肝癌SMMC7721细胞生长 | 第38-39页 |
| 2.4.3 莱菔素诱导肝癌HepG2细胞凋亡 | 第39-40页 |
| 2.4.4 莱菔素诱导肝癌SMMC7721细胞凋亡 | 第40-41页 |
| 2.5 本章小结 | 第41-42页 |
| 第三章 肝癌HepG2细胞系蛋白二维电泳技术的建立及优化 | 第42-58页 |
| 3.1 前言 | 第42页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第42-46页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第42-45页 |
| 3.2.1.1 细胞系 | 第42页 |
| 3.2.1.2 实验耗材 | 第42-43页 |
| 3.2.1.3 实验试剂 | 第43-44页 |
| 3.2.1.4 主要实验试剂的配制 | 第44-45页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第45-46页 |
| 3.3 实验内容 | 第46-50页 |
| 3.3.1 处理细胞 | 第46页 |
| 3.3.2 收集及处理蛋白 | 第46-47页 |
| 3.3.3 蛋白定量 | 第47页 |
| 3.3.4 二维电泳 | 第47-49页 |
| 3.3.5 凝胶染色 | 第49-50页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第50-56页 |
| 3.4.1 蛋白定量方法的比较 | 第50-51页 |
| 3.4.2 不同蛋白纯化方法的比较 | 第51-52页 |
| 3.4.3 一向等电聚焦IPG固化胶条长度的选择 | 第52-53页 |
| 3.4.4 一向等电聚焦IPG固化胶条pH线性范围的选择 | 第53页 |
| 3.4.5 一向等电聚焦程序的选择 | 第53-54页 |
| 3.4.6 染色方法的选择 | 第54-55页 |
| 3.4.7 其他方面的优化 | 第55-56页 |
| 3.5 本章小结 | 第56-58页 |
| 第四章 莱菔素作用HepG2细胞的蛋白质二维电泳分析 | 第58-66页 |
| 4.1 前言 | 第58页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第58-60页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第58-60页 |
| 4.2.1.1 实验耗材 | 第58-59页 |
| 4.2.1.2 实验试剂 | 第59页 |
| 4.2.1.3 主要实验试剂的配制 | 第59-60页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第60页 |
| 4.3 实验内容 | 第60-62页 |
| 4.3.1 制备三组重复的分析胶 | 第60-61页 |
| 4.3.2 PDQuest凝胶图像分析 | 第61-62页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第62-64页 |
| 4.4.1 空白对照组和实验组银染二维电泳图谱 | 第62-63页 |
| 4.4.2 PDQuest分析差异蛋白 | 第63-64页 |
| 4.5 本章小结 | 第64-66页 |
| 第五章 二维电泳差异表达蛋白质的质谱鉴定和验证 | 第66-78页 |
| 5.1 前言 | 第66页 |
| 5.2 实验材料与仪器 | 第66-69页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第66-68页 |
| 5.2.1.1 实验耗材 | 第66-67页 |
| 5.2.1.2 实验试剂 | 第67-68页 |
| 5.2.1.3 主要实验试剂的配制 | 第68页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第68-69页 |
| 5.3 实验内容 | 第69-71页 |
| 5.3.1 制备制备胶 | 第69页 |
| 5.3.2 挖取差异蛋白点 | 第69页 |
| 5.3.3 差异蛋白点质谱鉴定 | 第69页 |
| 5.3.4 蛋白免疫印迹实验检测关键蛋白KRT8和KRT18 | 第69-71页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第71-77页 |
| 5.4.1 制备胶图谱 | 第71页 |
| 5.4.2 差异蛋白质信息 | 第71-75页 |
| 5.4.3 蛋白标准曲线 | 第75-76页 |
| 5.4.4 关键蛋白KRT8和KRT18的表达情况 | 第76-77页 |
| 5.5 本章小结 | 第77-78页 |
| 第六章 莱菔素通过抑制KRT8的表达促进肝癌细胞失巢凋亡 | 第78-88页 |
| 6.1 前言 | 第78页 |
| 6.2 实验材料与仪器 | 第78-80页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第78-80页 |
| 6.2.1.1 细胞系 | 第78页 |
| 6.2.1.2 实验耗材 | 第78-79页 |
| 6.2.1.3 实验试剂 | 第79-80页 |
| 6.2.1.4 主要实验试剂的配制 | 第80页 |
| 6.2.2 实验仪器 | 第80页 |
| 6.3 实验内容 | 第80-83页 |
| 6.3.1 蛋白免疫印迹实验检测关键蛋白KRT8、KRT18、Fas和cFlip | 第81-82页 |
| 6.3.2 失巢凋亡模型的构建 | 第82页 |
| 6.3.3 转染KRT8/18 siRNA | 第82-83页 |
| 6.3.4 流式细胞仪测细胞凋亡 | 第83页 |
| 6.3.5 统计学分析 | 第83页 |
| 6.4 实验结果与讨论 | 第83-87页 |
| 6.4.1 莱菔素处理与失巢凋亡模型中KRT8和KRT18的表达情况 | 第83-84页 |
| 6.4.2 莱菔素处理关键蛋白Fas和cFlip的表达情况 | 第84页 |
| 6.4.3 转染KRT8/18 siRNA蛋白的表达情况 | 第84-85页 |
| 6.4.4 失巢凋亡模型与转染KRT8/18的肝癌细胞凋亡情况 | 第85-87页 |
| 6.5 本章小结 | 第87-88页 |
| 第七章 结论、创新点及展望 | 第88-90页 |
| 7.1 结论 | 第88页 |
| 7.2 创新点 | 第88-89页 |
| 7.3 展望 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
| 研究成果和发表的学术论文 | 第96-98页 |
| 作者和导师简介 | 第98-99页 |
| 附件 | 第99-100页 |
