| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-23页 |
| 1.1 木聚糖 | 第9页 |
| 1.2 木聚糖酶 | 第9-13页 |
| 1.2.1 木聚糖酶的分类 | 第10-11页 |
| 1.2.2 木聚糖酶的结构域 | 第11-12页 |
| 1.2.3 木聚糖酶的催化机制 | 第12-13页 |
| 1.3 GH11家族木聚糖酶的结构及功能特性 | 第13-14页 |
| 1.3.1 GH11家族木聚糖酶的结构特性 | 第13-14页 |
| 1.3.2 GH11家族木聚糖酶的酶学性质 | 第14页 |
| 1.4 木聚糖酶的应用 | 第14-18页 |
| 1.4.1 木聚糖酶在动物饲料中的应用 | 第14-15页 |
| 1.4.2 木聚糖酶在食品工业中的应用 | 第15-16页 |
| 1.4.3 木聚糖酶在造纸工业中的应用 | 第16-17页 |
| 1.4.4 木聚糖酶在能源方面的应用 | 第17-18页 |
| 1.5 木聚糖酶研究进展 | 第18-19页 |
| 1.5.1 嗜盐/耐盐酶的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.6 木聚糖酶的分子改造 | 第19-21页 |
| 1.6.1 理性设计 | 第19-20页 |
| 1.6.2 体外定向进化 | 第20-21页 |
| 1.7 课题的研究意义及内容 | 第21-23页 |
| 1.7.1 研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第23页 |
| 2.1.2 试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.3 仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.4 实验主要溶液和培养基的配制 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-41页 |
| 2.2.1 木聚糖酶Xyn22结构模拟 | 第27页 |
| 2.2.2 木聚糖酶Xyn22结构及序列分析 | 第27-28页 |
| 2.2.3 木聚糖酶Xyn22突变体的构建 | 第28-36页 |
| 2.2.3.1 重叠延伸PCR构建突变体 | 第28-31页 |
| 2.2.3.2 酶切连接法构建突变体 | 第31-36页 |
| 2.2.4 大肠杆菌的诱导表达及纯化 | 第36-38页 |
| 2.2.5 重组蛋白的酶学性质研究 | 第38-39页 |
| 2.2.6 木聚糖酶Xyn22和T10Y水解产物分析 | 第39-41页 |
| 3 结果与讨论 | 第41-59页 |
| 3.1 木聚糖酶Xyn22同源结构模拟 | 第41页 |
| 3.2 木聚糖酶Xyn22突变体的构建 | 第41-43页 |
| 3.2.1 重叠延伸PCR构建突变体T10Y | 第41-42页 |
| 3.2.2 野生型Xyn22和突变型T10Y的蛋白表达及纯化 | 第42-43页 |
| 3.3 Xyn22和T10Y的酶学性质分析 | 第43-49页 |
| 3.3.1 最适pH和最适温度 | 第43-44页 |
| 3.3.2 热稳定性和pH稳定性 | 第44-46页 |
| 3.3.3 蛋白定量标准曲线及比活的测定 | 第46页 |
| 3.3.4 动力学分析 | 第46-47页 |
| 3.3.5 不同浓度盐离子对Xyn22和T10Y酶活性的影响 | 第47页 |
| 3.3.6 金属离子及化学试剂对对Xyn22和T10Y酶活性的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.7 野生型Xyn22和突变型T10Y的TLC水解产物分析 | 第48-49页 |
| 3.4 木聚糖酶Xyn22盐适应性机制研究 | 第49-59页 |
| 3.4.1 木聚糖酶Xyn22氨基酸序列及结构分析 | 第49-52页 |
| 3.4.2 突变体D50A、E137A、E139A、D167/E169A、E137A/D167/E169A、E139A/D167/E169A的构建 | 第52-55页 |
| 3.4.3 突变体D50A、E137A、E139A、D167A/E169A、E137A/D167/E169A、E139A/D167/E169A蛋白表达及纯化 | 第55页 |
| 3.4.4 突变体D50A、E137A、E139A、D167A/E169A、E137A/D167/E169A、E139A/D167/E169A比活的测定 | 第55-57页 |
| 3.4.5 不同浓度盐离子对突变体D50A、E137A、E139A、D167A/E169A、E137A/D167/E169A、E139A/D167/E169A酶活性的影响 | 第57-59页 |
| 4 结论 | 第59-60页 |
| 5 展望 | 第60-61页 |
| 6 参考文献 | 第61-68页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第68-69页 |
| 8 致谢 | 第69页 |
