| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-18页 |
| 1.1 木聚糖及木聚糖降解酶系 | 第9页 |
| 1.2 木聚糖酶的研究进展 | 第9-12页 |
| 1.2.1 木聚糖酶的分类 | 第9-10页 |
| 1.2.2 木聚糖酶的结构与催化机制 | 第10-11页 |
| 1.2.3 木聚糖酶的应用 | 第11-12页 |
| 1.3 β-木糖苷酶的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.3.1 β-木糖苷酶的分类 | 第12页 |
| 1.3.2 β-木糖苷酶的结构与催化机制 | 第12-13页 |
| 1.3.3 β-木糖苷酶的应用 | 第13-14页 |
| 1.4 低温木聚糖酶的适冷机制 | 第14页 |
| 1.5 木聚糖酶的分子克隆 | 第14-16页 |
| 1.5.1 基因获取方法 | 第15页 |
| 1.5.2 TAIL-PCR技术简介 | 第15页 |
| 1.5.3 Overlap-PCR简介 | 第15-16页 |
| 1.6 分子改造 | 第16页 |
| 1.6.1 理性设计 | 第16页 |
| 1.6.2 定向进化 | 第16页 |
| 1.7 课题的研究意义及内容 | 第16-18页 |
| 1.7.1 研究意义 | 第16-17页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第17-18页 |
| 2 材料和方法 | 第18-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第18页 |
| 2.1.2 试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 仪器 | 第19页 |
| 2.1.4 实验主要溶液和培养基的配制 | 第19-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-42页 |
| 2.2.1 真菌基因组DNA的提取及保守区片段的克隆 | 第21页 |
| 2.2.2 GH10家族木聚糖酶保守区基因片段的扩增和序列分析 | 第21-22页 |
| 2.2.3 Xyn27基因的克隆及序列分析 | 第22-26页 |
| 2.2.4 原核表达载体的构建 | 第26-31页 |
| 2.2.5 真核表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.6 pET28a(+)-Xyn27在大肠杆菌中的表达纯化 | 第32-33页 |
| 2.2.7 重组质粒pPIC9-Xyn27在毕赤酵母中的表达纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.8 重组木聚糖酶的酶学性质分析 | 第34-36页 |
| 2.2.9 Xyn27水解产物分析 | 第36-37页 |
| 2.2.10 结构模拟 | 第37页 |
| 2.2.11 ax543的分子改造 | 第37-40页 |
| 2.2.12 重组木糖苷酶活性测定 | 第40-42页 |
| 3 结果与讨论 | 第42-57页 |
| 3.1 SDS-CTAB法提取真菌基因组 | 第42页 |
| 3.2 GH10木聚糖酶家族保守区基因片段的克隆 | 第42-43页 |
| 3.3 木聚糖酶全长序列的克隆、分析 | 第43-45页 |
| 3.3.1 木聚糖酶基因全长的克隆 | 第43页 |
| 3.3.2 木聚糖酶基因全长序列的分析 | 第43-44页 |
| 3.3.3 Xyn27结构模拟 | 第44-45页 |
| 3.4 表达体系的构建 | 第45-46页 |
| 3.4.1 原核表达载体pET28a(+)-Xyn27的构建 | 第45-46页 |
| 3.4.2 毕赤酵母表达系统的构建 | 第46页 |
| 3.5 重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第46-47页 |
| 3.6 重组酶的酶学性质分析 | 第47-51页 |
| 3.6.1 最适pH和pH稳定性 | 第47-48页 |
| 3.6.2 最适温度和热稳定性 | 第48页 |
| 3.6.3 Xyn27与其他低温酶分子结构差异分析 | 第48-49页 |
| 3.6.4 金属离子及化学试剂对Xyn27酶活性影响 | 第49-50页 |
| 3.6.5 动力学分析 | 第50-51页 |
| 3.7 水解产物分析 | 第51页 |
| 3.7.1 TLC法Xyn27水解产物分析 | 第51页 |
| 3.8 ax543分子改造 | 第51-57页 |
| 3.8.1 定点突变位点确定 | 第51-55页 |
| 3.8.2 同组基因片段扩增 | 第55-56页 |
| 3.8.3 突变体在毕赤酵母中的表达 | 第56页 |
| 3.8.4 ax543突变菌株酶活测定 | 第56-57页 |
| 4 结论 | 第57-58页 |
| 5 展望 | 第58-59页 |
| 6 参考文献 | 第59-65页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第65-66页 |
| 8 致谢 | 第66页 |
