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番茄冷调控蛋白SlCOR413IM1的功能分析

符号说明第4-9页
中文摘要第9-11页
Abstract第11-12页
1 前言第13-24页
    1.1 COR蛋白研究进展第13-18页
        1.1.1 COR15蛋白的结构及作用机制第13-15页
        1.1.2 COR413蛋白的结构及作用机制第15-17页
        1.1.3 COR蛋白在逆境胁迫中的功能第17-18页
            1.1.3.1 COR蛋白在低温胁迫中的功能第17-18页
            1.1.3.2 COR蛋白在干旱胁迫中的功能第18页
            1.1.3.3 COR蛋白在盐胁迫中的功能第18页
    1.2 植物低温信号网络第18-21页
    1.3 低温对植物的影响第21-22页
    1.4 干旱对植物的影响第22-23页
    1.5 本研究的目的和意义第23-24页
2 材料与方法第24-45页
    2.1 实验材料第24-27页
        2.1.1 植物材料第24页
        2.1.2 材料的培养和处理第24-25页
        2.1.3 菌株与质粒第25页
        2.1.4 生化试剂及各种酶第25页
        2.1.5 PCR引物第25-26页
        2.1.6 培养基第26-27页
    2.2 实验方法第27-45页
        2.2.1 植物总RNA的提取第27-28页
        2.2.2 反转录合成cDNA第28-29页
        2.2.3 SlCOR413IM1基因的克隆第29-30页
        2.2.4 目的片段回收第30页
        2.2.5 克隆载体的构建第30-32页
            2.2.5.1 目的片段与克隆载体的连接第30页
            2.2.5.2 大肠杆菌感受态的制备第30-31页
            2.2.5.3 大肠杆菌转化、筛选与测序第31页
            2.2.5.4 大肠杆菌质粒DNA的提取第31-32页
        2.2.6 真核表达载体的构建第32-34页
            2.2.6.1 目的片段与表达载体的连接、转化与筛选第32-33页
            2.2.6.2 根癌农杆菌感受态细胞的制备第33页
            2.2.6.3 农杆菌转化第33-34页
        2.2.7 农杆菌介导的遗传转化第34-35页
            2.2.7.1 农杆菌介导转化番茄第34-35页
            2.2.7.2 农杆菌介导转化烟草第35页
        2.2.8 转基因植株的鉴定第35-37页
            2.2.8.1 CTAB法提取植物基因组DNA第35-36页
            2.2.8.2 转基因植株的筛选第36页
            2.2.8.3 转基因植株表达量的测定第36-37页
        2.2.9 SlCOR413IM1蛋白的亚细胞定位第37-38页
            2.2.9.1 GFP载体的构建第37页
            2.2.9.2 拟南芥原生质体的提取第37-38页
            2.2.9.3 瞬时转化拟南芥原生质体第38页
        2.2.10 实时荧光定量PCR第38页
        2.2.11 叶绿体结构的亚显微观察第38-39页
        2.2.12 转基因植株生理指标的测定第39-44页
            2.2.12.1 番茄幼苗的抗低温能力的分析第39页
            2.2.12.2 烟草幼苗的抗干旱能力的分析第39页
            2.2.12.3 相对含水量和失水率的测定第39页
            2.2.12.4 叶片台盼蓝染色分析第39页
            2.2.12.5 电解质外渗和膜脂过氧化程度的测定第39-40页
            2.2.12.6 游离脯氨酸和可溶性糖含量的测定第40页
            2.2.12.7 H_2O_2和O_2~(·?)的定性与定量分析第40-41页
            2.2.12.8 SOD和APX活性的测定第41页
            2.2.12.9 GAPDH和sFBPase活性的测定第41页
            2.2.12.10 净光合速率的测定第41页
            2.2.12.11 叶绿素荧光参数的测定第41-42页
            2.2.12.12 叶绿素含量测定第42页
            2.2.12.13 类囊体膜蛋白和植物总蛋白的提取第42页
            2.2.12.14 Western blot分析第42-44页
        2.2.13 数据分析第44-45页
3 结果与分析第45-68页
    3.1 SlCOR413IM1基因的分离及其特征第45-47页
        3.1.1 SlCOR413IM1基因全长cDNA序列的克隆第45页
        3.1.2 SlCOR413IM1基因及其编码蛋白的序列分析第45-47页
    3.2 SlCOR413IM1蛋白的亚细胞定位第47页
    3.3 SlCOR413IM1基因在番茄中的表达分析第47-50页
        3.3.1 SlCOR413IM1基因在番茄不同器官中的表达分析第47-48页
        3.3.2 SlCOR413IM1基因诱导表达分析第48-50页
    3.4 SlCOR413IM1基因在番茄中的遗传转化第50-52页
        3.4.1 SlCOR413IM1基因正反义表达载体的构建第50-51页
        3.4.2 转SlCOR413IM1基因植株的鉴定第51-52页
    3.5 过表达SlCOR413IM1基因增强了转基因番茄的低温抗性第52-59页
        3.5.1 低温胁迫下转基因幼苗的生长情况第52-53页
        3.5.2 低温胁迫下转基因番茄成苗的生长分析第53-54页
        3.5.3 过表达SlCOR413IM1基因缓解了低温胁迫下的细胞膜的伤害第54-55页
        3.5.4 过表达SlCOR413IM1减轻了低温胁迫对叶绿体结构的伤害第55-56页
        3.5.5 过表达SlCOR413IM1对光合作用的影响第56-58页
        3.5.6 过表达SlCOR413IM1基因缓解了低温胁迫下ROS的积累第58-59页
    3.6 过表达SlCOR413IM1基因烟草的获得和鉴定第59-60页
    3.7 过表达SlCOR413IM1基因增强了转基因烟草的干旱抗性第60-68页
        3.7.1 过表达SlCOR413IM1提高干旱胁迫下幼苗的生长情况第60-61页
        3.7.2 过表达SlCOR413IM1基因增强了转基因烟草成苗的干旱抗性第61-63页
        3.7.3 过表达SlCOR413IM1缓解了细胞膜的损伤和积累了更多的渗透性物质第63-64页
        3.7.4 过表达SlCOR413IM1缓解了ROS的积累第64-65页
        3.7.5 过表达SlCOR413IM1维持较高的SOD和APX活性第65-66页
        3.7.6 过表达SlCOR413IM1基因缓解了干旱胁迫下的PSII的光抑制第66-68页
4 讨论第68-72页
    4.1 SlCOR413IM1基因的序列分析第68页
    4.2 SlCOR413IM1影响了番茄的低温抗性第68-70页
    4.3 过表达SlCOR413IM1基因增强了转基因烟草的干旱抗性第70-72页
5 结论第72-73页
参考文献第73-80页
致谢第80-81页
攻读学位期间发表的论文第81页

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