符号说明 | 第4-9页 |
中文摘要 | 第9-11页 |
Abstract | 第11-12页 |
1 前言 | 第13-24页 |
1.1 COR蛋白研究进展 | 第13-18页 |
1.1.1 COR15蛋白的结构及作用机制 | 第13-15页 |
1.1.2 COR413蛋白的结构及作用机制 | 第15-17页 |
1.1.3 COR蛋白在逆境胁迫中的功能 | 第17-18页 |
1.1.3.1 COR蛋白在低温胁迫中的功能 | 第17-18页 |
1.1.3.2 COR蛋白在干旱胁迫中的功能 | 第18页 |
1.1.3.3 COR蛋白在盐胁迫中的功能 | 第18页 |
1.2 植物低温信号网络 | 第18-21页 |
1.3 低温对植物的影响 | 第21-22页 |
1.4 干旱对植物的影响 | 第22-23页 |
1.5 本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
2 材料与方法 | 第24-45页 |
2.1 实验材料 | 第24-27页 |
2.1.1 植物材料 | 第24页 |
2.1.2 材料的培养和处理 | 第24-25页 |
2.1.3 菌株与质粒 | 第25页 |
2.1.4 生化试剂及各种酶 | 第25页 |
2.1.5 PCR引物 | 第25-26页 |
2.1.6 培养基 | 第26-27页 |
2.2 实验方法 | 第27-45页 |
2.2.1 植物总RNA的提取 | 第27-28页 |
2.2.2 反转录合成cDNA | 第28-29页 |
2.2.3 SlCOR413IM1基因的克隆 | 第29-30页 |
2.2.4 目的片段回收 | 第30页 |
2.2.5 克隆载体的构建 | 第30-32页 |
2.2.5.1 目的片段与克隆载体的连接 | 第30页 |
2.2.5.2 大肠杆菌感受态的制备 | 第30-31页 |
2.2.5.3 大肠杆菌转化、筛选与测序 | 第31页 |
2.2.5.4 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第31-32页 |
2.2.6 真核表达载体的构建 | 第32-34页 |
2.2.6.1 目的片段与表达载体的连接、转化与筛选 | 第32-33页 |
2.2.6.2 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第33页 |
2.2.6.3 农杆菌转化 | 第33-34页 |
2.2.7 农杆菌介导的遗传转化 | 第34-35页 |
2.2.7.1 农杆菌介导转化番茄 | 第34-35页 |
2.2.7.2 农杆菌介导转化烟草 | 第35页 |
2.2.8 转基因植株的鉴定 | 第35-37页 |
2.2.8.1 CTAB法提取植物基因组DNA | 第35-36页 |
2.2.8.2 转基因植株的筛选 | 第36页 |
2.2.8.3 转基因植株表达量的测定 | 第36-37页 |
2.2.9 SlCOR413IM1蛋白的亚细胞定位 | 第37-38页 |
2.2.9.1 GFP载体的构建 | 第37页 |
2.2.9.2 拟南芥原生质体的提取 | 第37-38页 |
2.2.9.3 瞬时转化拟南芥原生质体 | 第38页 |
2.2.10 实时荧光定量PCR | 第38页 |
2.2.11 叶绿体结构的亚显微观察 | 第38-39页 |
2.2.12 转基因植株生理指标的测定 | 第39-44页 |
2.2.12.1 番茄幼苗的抗低温能力的分析 | 第39页 |
2.2.12.2 烟草幼苗的抗干旱能力的分析 | 第39页 |
2.2.12.3 相对含水量和失水率的测定 | 第39页 |
2.2.12.4 叶片台盼蓝染色分析 | 第39页 |
2.2.12.5 电解质外渗和膜脂过氧化程度的测定 | 第39-40页 |
2.2.12.6 游离脯氨酸和可溶性糖含量的测定 | 第40页 |
2.2.12.7 H_2O_2和O_2~(·?)的定性与定量分析 | 第40-41页 |
2.2.12.8 SOD和APX活性的测定 | 第41页 |
2.2.12.9 GAPDH和sFBPase活性的测定 | 第41页 |
2.2.12.10 净光合速率的测定 | 第41页 |
2.2.12.11 叶绿素荧光参数的测定 | 第41-42页 |
2.2.12.12 叶绿素含量测定 | 第42页 |
2.2.12.13 类囊体膜蛋白和植物总蛋白的提取 | 第42页 |
2.2.12.14 Western blot分析 | 第42-44页 |
2.2.13 数据分析 | 第44-45页 |
3 结果与分析 | 第45-68页 |
3.1 SlCOR413IM1基因的分离及其特征 | 第45-47页 |
3.1.1 SlCOR413IM1基因全长cDNA序列的克隆 | 第45页 |
3.1.2 SlCOR413IM1基因及其编码蛋白的序列分析 | 第45-47页 |
3.2 SlCOR413IM1蛋白的亚细胞定位 | 第47页 |
3.3 SlCOR413IM1基因在番茄中的表达分析 | 第47-50页 |
3.3.1 SlCOR413IM1基因在番茄不同器官中的表达分析 | 第47-48页 |
3.3.2 SlCOR413IM1基因诱导表达分析 | 第48-50页 |
3.4 SlCOR413IM1基因在番茄中的遗传转化 | 第50-52页 |
3.4.1 SlCOR413IM1基因正反义表达载体的构建 | 第50-51页 |
3.4.2 转SlCOR413IM1基因植株的鉴定 | 第51-52页 |
3.5 过表达SlCOR413IM1基因增强了转基因番茄的低温抗性 | 第52-59页 |
3.5.1 低温胁迫下转基因幼苗的生长情况 | 第52-53页 |
3.5.2 低温胁迫下转基因番茄成苗的生长分析 | 第53-54页 |
3.5.3 过表达SlCOR413IM1基因缓解了低温胁迫下的细胞膜的伤害 | 第54-55页 |
3.5.4 过表达SlCOR413IM1减轻了低温胁迫对叶绿体结构的伤害 | 第55-56页 |
3.5.5 过表达SlCOR413IM1对光合作用的影响 | 第56-58页 |
3.5.6 过表达SlCOR413IM1基因缓解了低温胁迫下ROS的积累 | 第58-59页 |
3.6 过表达SlCOR413IM1基因烟草的获得和鉴定 | 第59-60页 |
3.7 过表达SlCOR413IM1基因增强了转基因烟草的干旱抗性 | 第60-68页 |
3.7.1 过表达SlCOR413IM1提高干旱胁迫下幼苗的生长情况 | 第60-61页 |
3.7.2 过表达SlCOR413IM1基因增强了转基因烟草成苗的干旱抗性 | 第61-63页 |
3.7.3 过表达SlCOR413IM1缓解了细胞膜的损伤和积累了更多的渗透性物质 | 第63-64页 |
3.7.4 过表达SlCOR413IM1缓解了ROS的积累 | 第64-65页 |
3.7.5 过表达SlCOR413IM1维持较高的SOD和APX活性 | 第65-66页 |
3.7.6 过表达SlCOR413IM1基因缓解了干旱胁迫下的PSII的光抑制 | 第66-68页 |
4 讨论 | 第68-72页 |
4.1 SlCOR413IM1基因的序列分析 | 第68页 |
4.2 SlCOR413IM1影响了番茄的低温抗性 | 第68-70页 |
4.3 过表达SlCOR413IM1基因增强了转基因烟草的干旱抗性 | 第70-72页 |
5 结论 | 第72-73页 |
参考文献 | 第73-80页 |
致谢 | 第80-81页 |
攻读学位期间发表的论文 | 第81页 |