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拟南芥中依赖PAT10定位液泡膜的CBL-CIPK途径调控气孔运动

符号说明第4-8页
中文摘要第8-10页
Abstract第10-12页
1 前言第13-25页
    1.1 气孔运动第13-20页
        1.1.1 ABA与气孔运动第14-15页
        1.1.2 钙信号与气孔运动第15-17页
        1.1.3 离子通道与气孔运动第17-19页
        1.1.4 蓝光诱导气孔开放第19页
        1.1.5 液泡与气孔运动第19-20页
    1.2 CBL-CIPK复合体第20-23页
        1.2.1 CBL蛋白第20-22页
        1.2.2 CIPK蛋白第22-23页
    1.3 本研究的目的及意义第23-25页
2 材料与方法第25-42页
    2.1 材料第25-26页
        2.1.1 植物材料及生长条件第25页
        2.1.2 菌株和质粒第25页
        2.1.3 酶与各种生化试剂第25-26页
    2.2 方法第26-42页
        2.2.1 植物基因组DNA与总RNA的提取第26-28页
            2.2.1.1 植物基因组DNA的提取第26页
            2.2.1.2 植物总RNA的提取(试剂盒法)第26-27页
            2.2.1.3 反转录第27-28页
        2.2.2 构建表达载体第28-32页
            2.2.2.1 设计PCR引物第28-29页
            2.2.2.2 Phusion PCR扩增第29页
            2.2.2.3 回收PCR产物(试剂盒法)第29-30页
            2.2.2.4 构建克隆载体第30页
            2.2.2.5 大肠杆菌转化及质粒提取(试剂盒法)第30-31页
            2.2.2.6 DNA序列测定第31页
            2.2.2.7 LR反应第31-32页
            2.2.2.8 质粒DNA的酶切鉴定第32页
        2.2.3 拟南芥的遗传转化和转基因植物的筛选第32-34页
            2.2.3.1 农杆菌转化及鉴定第32-33页
            2.2.3.2 南芥的麟及遗传转化第33页
            2.2.3.3 转基因植物的筛选第33-34页
        2.2.4 生理学实验第34-35页
            2.2.4.1 ABA诱导的气孔关闭实验第34页
            2.2.4.2 ABA抑制光诱导的气孔开放实验第34页
            2.2.4.3 光诱导的气孔开放实验第34-35页
            2.2.4.4 植株干旱实验第35页
            2.2.4.5 叶绿素含量测定实验第35页
        2.2.5 药剂处理实验第35-36页
            2.2.5.1 LaCl_3处理第35-36页
            2.2.5.2 GUS染色实验第36页
        2.2.6 生化实验第36-39页
            2.2.6.1 膜蛋白的提取第36-37页
            2.2.6.2 蛋白免疫印迹(Western-blot)第37-38页
            2.2.6.3 双光子荧光互补实验(BiFC)第38-39页
        2.2.7 电生理学实验第39-41页
            2.2.7.1 保卫细胞原生质体提取第39-40页
            2.2.7.2 内向钙离子(Ca_(in)~(2+))电流记录第40-41页
        2.2.8 显微镜观察及图像处理第41-42页
3 结果与分析第42-58页
    3.1 pat10对ABA响应超敏感第42-45页
        3.1.1 pat10对ABA诱导的气孔关闭响应超敏感第42页
        3.1.2 保卫细胞中特异性过表达PAT10对ABA的响应不敏感第42-43页
        3.1.3 保卫细胞中特异性降低PAT10表达对ABA的响应超敏感第43-45页
    3.2 cbl2 cbl3对ABA响应超敏感第45-47页
        3.2.1 cbl2 cbl3对ABA诱导的气孔关闭超敏感第45-46页
        3.2.2 保卫细胞中CBL2的定位依赖于PAT10第46-47页
    3.3 PAT10和CBL2 CBL3通过调节钙信号参与调控ABA信号途径第47-49页
        3.3.1 pat10保卫细胞经ABA处理后钙离子内流加快第47-48页
        3.3.2 pat10保卫细胞经ABA处理后胞内钙水平升高第48-49页
        3.3.3 阻断Ca~(2+)内流使pat10和cbl2 cbl3对ABA响应不敏感第49页
    3.4 pat10和cbl2 cbl3保卫细胞中K~+稳态失衡第49-52页
        3.4.1 外施ABA使pat10和cbl2 cbl3保卫细胞的液泡碎片化加重第49-52页
        3.4.2 增加钾离子内流后pat10保卫细胞对ABA响应不敏感第52页
    3.5 CIPK9和CIPK17参与调控气孔运动第52-55页
        3.5.1 cipk9和cipk17保卫细胞对ABA的响应超敏感第52-53页
        3.5.2 CIPK9CA和CIPK17CA的转基因植株保卫细胞对ABA响应不敏感第53-54页
        3.5.3 CIPK9和CIPK17与CBL2和CBL3互作第54-55页
    3.6 CIPK9和CIPK17调控拟南芥的耐早性第55-58页
        3.6.1 cipk9和cipk17突变体更耐旱第55-56页
        3.6.2 cipk9,cipk17和cipk9cipk17,PAT10-RNAi植株中抗旱基因表达分析第56-58页
4 讨论第58-60页
5 结论第60-61页
参考文献第61-69页
致谢第69-71页
攻读学位期间发表论文情况第71页

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