符号说明 | 第4-8页 |
中文摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-12页 |
1 前言 | 第13-25页 |
1.1 气孔运动 | 第13-20页 |
1.1.1 ABA与气孔运动 | 第14-15页 |
1.1.2 钙信号与气孔运动 | 第15-17页 |
1.1.3 离子通道与气孔运动 | 第17-19页 |
1.1.4 蓝光诱导气孔开放 | 第19页 |
1.1.5 液泡与气孔运动 | 第19-20页 |
1.2 CBL-CIPK复合体 | 第20-23页 |
1.2.1 CBL蛋白 | 第20-22页 |
1.2.2 CIPK蛋白 | 第22-23页 |
1.3 本研究的目的及意义 | 第23-25页 |
2 材料与方法 | 第25-42页 |
2.1 材料 | 第25-26页 |
2.1.1 植物材料及生长条件 | 第25页 |
2.1.2 菌株和质粒 | 第25页 |
2.1.3 酶与各种生化试剂 | 第25-26页 |
2.2 方法 | 第26-42页 |
2.2.1 植物基因组DNA与总RNA的提取 | 第26-28页 |
2.2.1.1 植物基因组DNA的提取 | 第26页 |
2.2.1.2 植物总RNA的提取(试剂盒法) | 第26-27页 |
2.2.1.3 反转录 | 第27-28页 |
2.2.2 构建表达载体 | 第28-32页 |
2.2.2.1 设计PCR引物 | 第28-29页 |
2.2.2.2 Phusion PCR扩增 | 第29页 |
2.2.2.3 回收PCR产物(试剂盒法) | 第29-30页 |
2.2.2.4 构建克隆载体 | 第30页 |
2.2.2.5 大肠杆菌转化及质粒提取(试剂盒法) | 第30-31页 |
2.2.2.6 DNA序列测定 | 第31页 |
2.2.2.7 LR反应 | 第31-32页 |
2.2.2.8 质粒DNA的酶切鉴定 | 第32页 |
2.2.3 拟南芥的遗传转化和转基因植物的筛选 | 第32-34页 |
2.2.3.1 农杆菌转化及鉴定 | 第32-33页 |
2.2.3.2 南芥的麟及遗传转化 | 第33页 |
2.2.3.3 转基因植物的筛选 | 第33-34页 |
2.2.4 生理学实验 | 第34-35页 |
2.2.4.1 ABA诱导的气孔关闭实验 | 第34页 |
2.2.4.2 ABA抑制光诱导的气孔开放实验 | 第34页 |
2.2.4.3 光诱导的气孔开放实验 | 第34-35页 |
2.2.4.4 植株干旱实验 | 第35页 |
2.2.4.5 叶绿素含量测定实验 | 第35页 |
2.2.5 药剂处理实验 | 第35-36页 |
2.2.5.1 LaCl_3处理 | 第35-36页 |
2.2.5.2 GUS染色实验 | 第36页 |
2.2.6 生化实验 | 第36-39页 |
2.2.6.1 膜蛋白的提取 | 第36-37页 |
2.2.6.2 蛋白免疫印迹(Western-blot) | 第37-38页 |
2.2.6.3 双光子荧光互补实验(BiFC) | 第38-39页 |
2.2.7 电生理学实验 | 第39-41页 |
2.2.7.1 保卫细胞原生质体提取 | 第39-40页 |
2.2.7.2 内向钙离子(Ca_(in)~(2+))电流记录 | 第40-41页 |
2.2.8 显微镜观察及图像处理 | 第41-42页 |
3 结果与分析 | 第42-58页 |
3.1 pat10对ABA响应超敏感 | 第42-45页 |
3.1.1 pat10对ABA诱导的气孔关闭响应超敏感 | 第42页 |
3.1.2 保卫细胞中特异性过表达PAT10对ABA的响应不敏感 | 第42-43页 |
3.1.3 保卫细胞中特异性降低PAT10表达对ABA的响应超敏感 | 第43-45页 |
3.2 cbl2 cbl3对ABA响应超敏感 | 第45-47页 |
3.2.1 cbl2 cbl3对ABA诱导的气孔关闭超敏感 | 第45-46页 |
3.2.2 保卫细胞中CBL2的定位依赖于PAT10 | 第46-47页 |
3.3 PAT10和CBL2 CBL3通过调节钙信号参与调控ABA信号途径 | 第47-49页 |
3.3.1 pat10保卫细胞经ABA处理后钙离子内流加快 | 第47-48页 |
3.3.2 pat10保卫细胞经ABA处理后胞内钙水平升高 | 第48-49页 |
3.3.3 阻断Ca~(2+)内流使pat10和cbl2 cbl3对ABA响应不敏感 | 第49页 |
3.4 pat10和cbl2 cbl3保卫细胞中K~+稳态失衡 | 第49-52页 |
3.4.1 外施ABA使pat10和cbl2 cbl3保卫细胞的液泡碎片化加重 | 第49-52页 |
3.4.2 增加钾离子内流后pat10保卫细胞对ABA响应不敏感 | 第52页 |
3.5 CIPK9和CIPK17参与调控气孔运动 | 第52-55页 |
3.5.1 cipk9和cipk17保卫细胞对ABA的响应超敏感 | 第52-53页 |
3.5.2 CIPK9CA和CIPK17CA的转基因植株保卫细胞对ABA响应不敏感 | 第53-54页 |
3.5.3 CIPK9和CIPK17与CBL2和CBL3互作 | 第54-55页 |
3.6 CIPK9和CIPK17调控拟南芥的耐早性 | 第55-58页 |
3.6.1 cipk9和cipk17突变体更耐旱 | 第55-56页 |
3.6.2 cipk9,cipk17和cipk9cipk17,PAT10-RNAi植株中抗旱基因表达分析 | 第56-58页 |
4 讨论 | 第58-60页 |
5 结论 | 第60-61页 |
参考文献 | 第61-69页 |
致谢 | 第69-71页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第71页 |