| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-23页 |
| ·课题背景 | 第11-12页 |
| ·酿酒酵母育种发展方向 | 第12页 |
| ·Cre/loxp基因敲除系统 | 第12-16页 |
| ·酿酒酵母乙醇耐受性 | 第16-21页 |
| ·细胞膜等结构与酿酒酵母细胞高浓度乙醇胁迫耐受性 | 第17-18页 |
| ·转录水平调控与酿酒酵母细胞高浓度乙醇胁迫耐受性 | 第18-19页 |
| ·与高浓度乙醇胁迫相关的生理生化因子 | 第19-21页 |
| ·提高酿酒酵母乙醇耐受性 | 第21页 |
| ·本研究的目的、内容和实验流程 | 第21-23页 |
| ·研究目的 | 第21-22页 |
| ·研究内容及流程 | 第22-23页 |
| 第2章 酿酒酵母g5170和AAD10基因突变菌株的构建 | 第23-55页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第23-27页 |
| ·菌株及质粒 | 第23-24页 |
| ·主要培养基 | 第24-25页 |
| ·试剂 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-41页 |
| ·酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的培养方法 | 第27页 |
| ·酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)小量基因组DNA抽提 | 第27-28页 |
| ·小量质粒提取 | 第28-29页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及质粒转化 | 第29-30页 |
| ·醋酸锂介导的高效酵母转化步骤 | 第30-31页 |
| ·目的条带割胶回收 | 第31-32页 |
| ·生物信息与数据分析 | 第32页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第32-33页 |
| ·敲除黄酒酵母D2中新基因g5170 | 第33-38页 |
| ·敲除酿酒酵母BY4741中基因AAD10的敲除 | 第38-40页 |
| ·影印平板法 | 第40-41页 |
| ·筛选标记的切除 | 第41页 |
| ·pSH65质粒的诱导丢失 | 第41页 |
| ·实验结果 | 第41-55页 |
| ·黄酒酵母D2中新基因g5170的基因敲除 | 第41-49页 |
| ·酿酒酵母BY4741中基因AAD10的敲除 | 第49-53页 |
| ·小结与讨论 | 第53-55页 |
| 第3章 突变菌株D2-△g5170发酵及酒精耐受性分析 | 第55-67页 |
| ·实验试剂和仪器 | 第55-57页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·主要试剂 | 第55-56页 |
| ·主要仪器 | 第56-57页 |
| ·实验方法 | 第57-60页 |
| ·环境胁迫耐受性分析 | 第57-58页 |
| ·基因敲除菌株生长速率分析 | 第58页 |
| ·黄酒发酵过程 | 第58页 |
| ·数据处理 | 第58页 |
| ·理化指标的测定 | 第58-60页 |
| ·实验结果 | 第60-65页 |
| ·敲除酵母菌株在不同胁迫条件下的生长实验 | 第60-63页 |
| ·基因敲除菌株生长速率分析 | 第63-64页 |
| ·发酵性能比较结果 | 第64-65页 |
| ·本章小结 | 第65-67页 |
| 第4章 结论、展望与存在的问题 | 第67-69页 |
| ·结论 | 第67页 |
| ·展望 | 第67-68页 |
| ·存在问题 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
