摘要 | 第1-5页 |
ABSTRACT | 第5-12页 |
第一章 前言 | 第12-24页 |
·大肠杆菌及铜绿假单胞菌简介 | 第12页 |
·PBPs | 第12-14页 |
·PBPs概述 | 第12-13页 |
·PBPs的结构和功能 | 第13-14页 |
·细菌的耐药性机制 | 第14页 |
·PBP与细菌耐药性的关系 | 第14-15页 |
·抗生素与PBP的作用 | 第14页 |
·PBP的改变使细菌产生耐药性 | 第14-15页 |
·重组蛋白技术概述 | 第15-22页 |
·重组质粒的构建 | 第15-16页 |
·重组蛋白的诱导表达 | 第16-17页 |
·重组蛋白的纯化 | 第17-18页 |
·包涵体蛋白体外复性 | 第18-19页 |
·重组蛋白的检测 | 第19-20页 |
·重组蛋白活性分析 | 第20-22页 |
·研究的目的和意义 | 第22-24页 |
第二章 黏肽合成酶原核表达载体pET-44b-PBP1b/PBP3的构建 | 第24-42页 |
·实验材料和仪器 | 第24-25页 |
·菌种和质粒 | 第24页 |
·实验试剂 | 第24页 |
·试剂制备 | 第24页 |
·主要仪器和设备 | 第24-25页 |
·实验方法 | 第25-32页 |
·菌种的活化 | 第25页 |
·大肠杆菌和铜绿假单胞菌基因组DNA的提取与纯化 | 第25页 |
·引物的设计与合成 | 第25-26页 |
·目的基因扩增 | 第26-27页 |
·PCR产物的回收及纯化 | 第27页 |
·重组克隆质粒pMD19-T-PBP1b和pMD19-T-PBP3的构建 | 第27-28页 |
·转化 | 第28-29页 |
·阳性质粒的抽提 | 第29页 |
·双酶切获取目的基因片段 | 第29-30页 |
·带酶切位点pET44b(+)质粒的获取 | 第30-31页 |
·重组表达质粒的构建 | 第31-32页 |
·实验结果 | 第32-39页 |
·PCR扩增获得目的基因 | 第32-33页 |
·基因PCR产物测序及DNAMAN分析 | 第33-36页 |
·阳性克隆质粒pMD19-T-PBP1b和pMD19-T-PBP3的筛选和鉴定结果 | 第36-37页 |
·重组表达质粒pET44b(+)-PBP1b和pET44b(+)-PBP3的构建及鉴定 | 第37-39页 |
·小结 | 第39-42页 |
第三章 大肠杆菌PBP1b和铜绿假单胞菌PBP3基因表达及其条件优化 | 第42-56页 |
·实验材料和仪器 | 第42-44页 |
·实验材料 | 第42-44页 |
·仪器设备 | 第44页 |
·实验方法 | 第44-47页 |
·小量诱导重组蛋白表达 | 第44-45页 |
·SDS-PAGE电泳 | 第45页 |
·重组蛋白鉴定 | 第45-47页 |
·表达条件的优化 | 第47页 |
·实验结果 | 第47-54页 |
·重组蛋白的表达 | 第47-50页 |
·重组重组蛋白的表达条件优化 | 第50-54页 |
·本章小结 | 第54-56页 |
第四章 大肠杆菌PBP1b和铜绿假单胞菌PBP3蛋白复性、纯化 | 第56-74页 |
·实验材料和仪器 | 第56-57页 |
·实验材料 | 第56页 |
·主要仪器和设备 | 第56-57页 |
·试验方法 | 第57-61页 |
·重组菌的扩大培养 | 第57页 |
·重组菌包涵体蛋白PBP1b的分离纯化及复性 | 第57-59页 |
·重组菌可溶蛋白PBP3的分离纯化 | 第59-60页 |
·纯化后蛋白脱盐 | 第60页 |
·纯化脱盐后蛋白浓缩 | 第60页 |
·重组重组蛋白浓度的测定 | 第60-61页 |
·实验结果 | 第61-71页 |
·Ni~(2+)-NTA亲和层析纯化可溶蛋白 | 第61-69页 |
·纯化后蛋白脱盐 | 第69-70页 |
·纯化后蛋白浓度测定 | 第70-71页 |
·本章小结 | 第71-74页 |
第五章 异硫氰酸荧光素标记氨苄青霉素的合成及其与青霉素结合蛋白的相互作用检测 | 第74-80页 |
·实验材料和仪器 | 第74-75页 |
·试剂 | 第74页 |
·主要溶液配制 | 第74-75页 |
·仪器设备 | 第75页 |
·实验方法 | 第75-76页 |
·Amp的荧光标记 | 第75-76页 |
·荧光标记的Amp检测PBPs生物活性 | 第76页 |
·实验结果分析 | 第76-78页 |
·FITC-Amp的标记 | 第76页 |
·PBP1b生物活性分析 | 第76-77页 |
·PBP3生物活性分析 | 第77-78页 |
·结论 | 第78-80页 |
第六章 总结与展望 | 第80-82页 |
参考文献 | 第82-92页 |
附录 | 第92-94页 |
发表论文情况 | 第94-96页 |
致谢 | 第96-98页 |