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大肠杆菌PBP1b和铜绿假单胞菌PBP3的表达纯化

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-12页
第一章 前言第12-24页
   ·大肠杆菌及铜绿假单胞菌简介第12页
   ·PBPs第12-14页
     ·PBPs概述第12-13页
     ·PBPs的结构和功能第13-14页
   ·细菌的耐药性机制第14页
   ·PBP与细菌耐药性的关系第14-15页
     ·抗生素与PBP的作用第14页
     ·PBP的改变使细菌产生耐药性第14-15页
   ·重组蛋白技术概述第15-22页
     ·重组质粒的构建第15-16页
     ·重组蛋白的诱导表达第16-17页
     ·重组蛋白的纯化第17-18页
     ·包涵体蛋白体外复性第18-19页
     ·重组蛋白的检测第19-20页
     ·重组蛋白活性分析第20-22页
   ·研究的目的和意义第22-24页
第二章 黏肽合成酶原核表达载体pET-44b-PBP1b/PBP3的构建第24-42页
   ·实验材料和仪器第24-25页
     ·菌种和质粒第24页
     ·实验试剂第24页
     ·试剂制备第24页
     ·主要仪器和设备第24-25页
   ·实验方法第25-32页
     ·菌种的活化第25页
     ·大肠杆菌和铜绿假单胞菌基因组DNA的提取与纯化第25页
     ·引物的设计与合成第25-26页
     ·目的基因扩增第26-27页
     ·PCR产物的回收及纯化第27页
       ·重组克隆质粒pMD19-T-PBP1b和pMD19-T-PBP3的构建第27-28页
       ·转化第28-29页
     ·阳性质粒的抽提第29页
     ·双酶切获取目的基因片段第29-30页
     ·带酶切位点pET44b(+)质粒的获取第30-31页
     ·重组表达质粒的构建第31-32页
   ·实验结果第32-39页
     ·PCR扩增获得目的基因第32-33页
     ·基因PCR产物测序及DNAMAN分析第33-36页
     ·阳性克隆质粒pMD19-T-PBP1b和pMD19-T-PBP3的筛选和鉴定结果第36-37页
     ·重组表达质粒pET44b(+)-PBP1b和pET44b(+)-PBP3的构建及鉴定第37-39页
   ·小结第39-42页
第三章 大肠杆菌PBP1b和铜绿假单胞菌PBP3基因表达及其条件优化第42-56页
   ·实验材料和仪器第42-44页
     ·实验材料第42-44页
     ·仪器设备第44页
   ·实验方法第44-47页
     ·小量诱导重组蛋白表达第44-45页
     ·SDS-PAGE电泳第45页
     ·重组蛋白鉴定第45-47页
     ·表达条件的优化第47页
   ·实验结果第47-54页
     ·重组蛋白的表达第47-50页
     ·重组重组蛋白的表达条件优化第50-54页
   ·本章小结第54-56页
第四章 大肠杆菌PBP1b和铜绿假单胞菌PBP3蛋白复性、纯化第56-74页
   ·实验材料和仪器第56-57页
     ·实验材料第56页
     ·主要仪器和设备第56-57页
   ·试验方法第57-61页
     ·重组菌的扩大培养第57页
     ·重组菌包涵体蛋白PBP1b的分离纯化及复性第57-59页
     ·重组菌可溶蛋白PBP3的分离纯化第59-60页
     ·纯化后蛋白脱盐第60页
     ·纯化脱盐后蛋白浓缩第60页
     ·重组重组蛋白浓度的测定第60-61页
   ·实验结果第61-71页
     ·Ni~(2+)-NTA亲和层析纯化可溶蛋白第61-69页
     ·纯化后蛋白脱盐第69-70页
     ·纯化后蛋白浓度测定第70-71页
   ·本章小结第71-74页
第五章 异硫氰酸荧光素标记氨苄青霉素的合成及其与青霉素结合蛋白的相互作用检测第74-80页
   ·实验材料和仪器第74-75页
     ·试剂第74页
     ·主要溶液配制第74-75页
     ·仪器设备第75页
   ·实验方法第75-76页
     ·Amp的荧光标记第75-76页
     ·荧光标记的Amp检测PBPs生物活性第76页
   ·实验结果分析第76-78页
     ·FITC-Amp的标记第76页
     ·PBP1b生物活性分析第76-77页
     ·PBP3生物活性分析第77-78页
   ·结论第78-80页
第六章 总结与展望第80-82页
参考文献第82-92页
附录第92-94页
发表论文情况第94-96页
致谢第96-98页

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