| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 主要符号表 | 第10-11页 |
| 引言 | 第11-21页 |
| 1 EPSPS的研究进展 | 第11-16页 |
| ·EPSPS的发现 | 第11-12页 |
| ·EPSPS基因来源 | 第12-13页 |
| ·EPSPS的合成过程 | 第13-14页 |
| ·植物EPSPS | 第13页 |
| ·微生物EPSPS | 第13-14页 |
| ·EPSPS的催化机理 | 第14-15页 |
| ·EPSPS的应用 | 第15-16页 |
| ·草甘膦及其与EPSP酶作用机制 | 第15页 |
| ·在抗菌素和抗寄生虫药物上的应用 | 第15页 |
| ·在医药工业中的应用 | 第15-16页 |
| 2 草甘膦（Glyphosate） | 第16-18页 |
| ·草甘膦的发展现状 | 第16-17页 |
| ·草甘膦转基因技术应用现状 | 第17-18页 |
| 3 EPSPS的应用现状及前景和我国研究进展 | 第18-19页 |
| ·应用现状及前景 | 第18-19页 |
| ·我国研究进展 | 第19页 |
| 4 研究目的和内容 | 第19-21页 |
| ·研究目的 | 第19-20页 |
| ·研究内容 | 第20-21页 |
| 材料与方法 | 第21-39页 |
| 1 材料 | 第21-27页 |
| ·实验仪器与软件 | 第21页 |
| ·使用到的质粒和菌株 | 第21页 |
| ·试验中使用到的引物 | 第21-24页 |
| ·相关培养基与溶液的配制 | 第24-25页 |
| ·试剂 | 第25-27页 |
| 2 方法 | 第27-39页 |
| ·引物设计和表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·SaaroAS基因片段的回收 | 第28-30页 |
| ·克隆与序列分析 | 第30-32页 |
| ·回收DNA与测序载体pMD18-T连接 | 第30页 |
| ·DNA与pMD18-T Vector的连接产物转化EG60感受态 | 第30页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA | 第30-31页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第31页 |
| ·DNA序列测定 | 第31-32页 |
| ·SaaroAS基因转化入大肠杆菌 | 第32-33页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32页 |
| ·大肠杆菌BL21热击转化 | 第32-33页 |
| ·SaaroAS基因的诱导表达及产物纯化 | 第33页 |
| ·SaaroAS基因的诱导表达 | 第33页 |
| ·SaaroAS基因表达产物纯化 | 第33页 |
| ·澳大利亚链球菌EPSPS蛋白电泳 | 第33-35页 |
| ·分离胶的灌制 | 第34页 |
| ·5%的浓缩胶的配制和灌制 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第34页 |
| ·染色、脱色 | 第34-35页 |
| ·澳大利亚链球菌EPSPS蛋白定量 | 第35页 |
| ·澳大利亚链球菌EPSPS的活性位点分析 | 第35页 |
| ·无机磷标准曲线的测定 | 第35-36页 |
| ·酶活性测定 | 第36页 |
| ·澳大利亚链球菌EPSPS的最适pH和温度 | 第36页 |
| ·澳大利亚链球菌EPSP酶的动力学常数的测定 | 第36-37页 |
| ·澳大利亚链球菌EPSPS对pH及温度稳定性的测量 | 第37页 |
| ·金属离子和EDTA对澳大利亚链球菌EPSP酶活性的影响 | 第37-38页 |
| ·草甘膦抗性研究方法及分析 | 第38-39页 |
| 结果 | 第39-55页 |
| 1 澳大利亚链球菌EPSPS SaaroAS基因的合成及鉴定 | 第39-43页 |
| ·SaaroAS基因的合成 | 第40页 |
| ·与野生性EPSPS序列比对 | 第40-42页 |
| ·表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 2 澳大利亚链球菌EPSPS的诱导表达和纯化 | 第43-44页 |
| ·SaaroAS基因插入原核表达载体及表达 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE验证及蛋白定量 | 第43-44页 |
| 3 澳大利亚链球菌EPSPS的活性位点分析 | 第44-55页 |
| ·澳大利亚链球菌EPSPS的进化树 | 第44-45页 |
| ·澳大利亚链球菌EPSPS与其他来源的蛋白之间的序列比对及其活性位点定位 | 第45-46页 |
| ·澳大利亚链球菌EPSPS的预测三级结构 | 第46页 |
| ·澳大利亚链球菌EPSPS的酶学特性的研究 | 第46-52页 |
| ·无机磷标准曲线 | 第47页 |
| ·澳大利亚链球菌EPSPS的最适pH和温度 | 第47-49页 |
| ·澳大利亚链球菌EPSPS的酶动力学常数测定 | 第49-50页 |
| ·澳大利亚链球菌EPSPS的pH稳定性和温度稳定性 | 第50-52页 |
| ·不同金属离子及EDTA对澳大利亚链球菌EPSP酶的影响 | 第52页 |
| ·澳大利亚链球菌EPSPS对草甘膦的抗性研究 | 第52-55页 |
| 讨论 | 第55-57页 |
| 本文结论与创新 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
