| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略名词表 | 第13-14页 |
| 第一章 dsdA新型筛选标记系统的研究 | 第14-51页 |
| 1 前言 | 第14-26页 |
| ·叶绿体基因组概况 | 第14-15页 |
| ·叶绿体基因工程的研究概况 | 第15-24页 |
| ·叶绿体转化的原理 | 第15-16页 |
| ·叶绿体转化的方法 | 第16-17页 |
| ·叶绿体转化的优点 | 第17页 |
| ·叶绿体基因工程的应用 | 第17-18页 |
| ·叶绿体转化中的筛选标记基因 | 第18-24页 |
| ·光合作用相关基因 | 第18-19页 |
| ·抗生素抗性基因 | 第19-20页 |
| ·除草剂抗性基因 | 第20-21页 |
| ·代谢途径相关基因 | 第21-22页 |
| ·新型非抗生素类叶绿体转化筛选标记基因 | 第22-23页 |
| ·开发新型单子叶植物叶绿体转化筛选标记基因的必要性 | 第23-24页 |
| ·研究目的与意义和技术路线 | 第24-26页 |
| ·研究目的和意义 | 第24-25页 |
| ·技术路线 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-32页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·植物材料和来源 | 第26页 |
| ·菌株和载体 | 第26页 |
| ·基因来源 | 第26页 |
| ·试剂和工具酶 | 第26-27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-32页 |
| ·叶绿体转化载体的构建 | 第27-28页 |
| ·烟草植物材料的准备 | 第28页 |
| ·基因枪遗传转化与筛选 | 第28页 |
| ·烟草植物基因组DNA抽提与Southern blot | 第28-29页 |
| ·烟草植物总RNA提取与Northern blot | 第29页 |
| ·同质化及母系遗传的验证 | 第29页 |
| ·dsdA叶绿体转化烟草对D-Ser的抗性测试 | 第29-30页 |
| ·单拷贝纯合转基因水稻的鉴定 | 第30页 |
| ·水稻RNA的提取，反转录，RT-PCR及qRT-PCR | 第30-31页 |
| ·dsdA核转化水稻植株对D-Ser的抗性测试 | 第31页 |
| ·叶绿素含量的测定 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-45页 |
| ·叶绿体转化载体的构建 | 第32-33页 |
| ·烟草转化植株的Southern blot检测 | 第33页 |
| ·烟草转化植株的Northern blot检测 | 第33-34页 |
| ·烟草转化植株的同质化验证及母系遗传的验证 | 第34-35页 |
| ·烟草转化植株对D-Ser的抗性测试 | 第35-39页 |
| ·转基因水稻的拷贝数检测和表达量检测 | 第39-40页 |
| ·转基因水稻愈伤的D-Ser抗性检测 | 第40-41页 |
| ·转基因水稻部分性状的统计 | 第41-44页 |
| ·不同水稻品种对D-Ser的敏感性测试 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-51页 |
| ·叶绿体转化系统的优化 | 第45-46页 |
| ·叶绿体转化中壮观霉素自发突变体的剔除 | 第46页 |
| ·叶绿体转化中表达元件的选择和利用 | 第46-47页 |
| ·dsdA基因在叶绿体转化中的应用前景 | 第47-51页 |
| 第二章 OsGLK1转录因子的功能研究 | 第51-70页 |
| 1 前言 | 第51-58页 |
| ·转录因子 | 第51页 |
| ·转录因子的研究方法 | 第51-54页 |
| ·生物信息学分析 | 第51-52页 |
| ·瞬间表达分析 | 第52页 |
| ·突变体表型分析 | 第52-53页 |
| ·酵母单杂交 | 第53-54页 |
| ·染色质免疫沉淀 | 第54页 |
| ·OsGLK1转录因子的研究进展 | 第54-57页 |
| ·研究目的和意义 | 第57-58页 |
| 2 材料与方法 | 第58-62页 |
| ·实验材料 | 第58-59页 |
| ·植物材料和来源 | 第58页 |
| ·菌株和载体 | 第58页 |
| ·试剂和工具酶 | 第58页 |
| ·引物 | 第58-59页 |
| ·实验方法 | 第59-62页 |
| ·载体的构建 | 第59-60页 |
| ·根癌农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第60页 |
| ·转基因植株的Southern blot检测 | 第60-61页 |
| ·RNA的提取，反转录，RT-PCR以及qRT-PCR | 第61页 |
| ·转基因植株的纯杂合鉴定 | 第61页 |
| ·转基因纯合株系农艺性状的考察 | 第61页 |
| ·蛋白质体外原核表达 | 第61-62页 |
| 3 结果与分析 | 第62-68页 |
| ·原核表达载体和亚细胞定位载体的构建 | 第62页 |
| ·OsGLK1蛋白的原核表达 | 第62-63页 |
| ·OsGLK1蛋白的纯化 | 第63-64页 |
| ·T0代转基因植株的拷贝数检测 | 第64-65页 |
| ·T_1代转基因植株的纯杂合鉴定 | 第65-66页 |
| ·T_1代单拷贝植株表达量检测 | 第66页 |
| ·纯合转基因株系农艺性状的考察 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-70页 |
| ·在光照条件下OsGLK1的转录后调节 | 第68页 |
| ·OsGLK1上调一系列叶绿体相关基因的机制与AtGLK1类似 | 第68-69页 |
| ·在质体分化过程中OsGLK1和OsGLK2的功能冗余 | 第69页 |
| ·OsGLK1可能牵涉到的防御反应有待研究 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-81页 |
| 附录 | 第81-91页 |
| 1 试剂配方 | 第81页 |
| 2 培养基配方 | 第81-82页 |
| 3 CTAB法提取烟草基因组DNA | 第82页 |
| 4 基因枪转化 | 第82-84页 |
| 5 密码子优化后的dsdA序列 | 第84-85页 |
| 6 水稻叶片基因组DNA的提取 | 第85页 |
| 7 Southern杂交 | 第85-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
