| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-36页 |
| ·宏基因组学 | 第15-19页 |
| ·宏基因组概述 | 第15页 |
| ·宏基因组的筛选策略 | 第15-17页 |
| ·宏基因组学的应用 | 第17-19页 |
| ·酯酶简介 | 第19-24页 |
| ·脂类水解酶 | 第19页 |
| ·脂类水解酶的特点 | 第19-20页 |
| ·结构特点 | 第20页 |
| ·催化机理 | 第20-21页 |
| ·酯酶和脂肪酶的区别 | 第21页 |
| ·酯酶的来源与筛选策略 | 第21-23页 |
| ·酯酶的应用 | 第23-24页 |
| ·非水相体系中的生物催化 | 第24-28页 |
| ·非水相体系中酶催化特点 | 第24-25页 |
| ·有机相中酶的稳定性 | 第25-26页 |
| ·有机相中酶的可溶性 | 第26页 |
| ·有机相中酶的其他特性 | 第26-27页 |
| ·酯酶/脂肪酶在非水相体系中的实际应用 | 第27-28页 |
| ·酯酶/脂肪酶在非水相中制备手性仲醇研究进展 | 第28-30页 |
| ·手性识别机理 | 第28页 |
| ·酯酶/脂肪酶在手性拆分中的应用 | 第28-30页 |
| ·酯酶/脂肪酶在制备香料香精化合物中的应用 | 第30-32页 |
| ·无溶剂体系 | 第31页 |
| ·有机溶剂 | 第31-32页 |
| ·酯酶的固定化 | 第32-34页 |
| ·固定化技术 | 第32-33页 |
| ·固定化酯酶的特性 | 第33页 |
| ·固定化酯酶的应用 | 第33-34页 |
| ·本课题研究意义和内容 | 第34-36页 |
| ·本课题研究目的及意义 | 第34-35页 |
| ·本课题研究内容 | 第35-36页 |
| 第2章 宏基因组文库的构建与酯酶筛选 | 第36-47页 |
| ·前言 | 第36页 |
| ·实验材料 | 第36-38页 |
| ·样品 | 第36页 |
| ·菌株和质粒 | 第36-37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·主要实验设备 | 第37页 |
| ·分子生物学操作试剂盒和工具酶 | 第37-38页 |
| ·主要试剂及溶液配制方法 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-41页 |
| ·深海污泥宏基因组DNA的提取 | 第38-39页 |
| ·宏基因组DNA的纯化 | 第39页 |
| ·宏基因组文库的构建与保存 | 第39页 |
| ·宏基因组文库Fosmid质粒的提取 | 第39页 |
| ·Fosmid文库质粒多样化鉴定 | 第39-40页 |
| ·宏基因组文库的筛选 | 第40页 |
| ·亚克隆文库的构建及序列分析 | 第40-41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-46页 |
| ·深海污泥宏基因组DNA的提取与Fosmid文库构建 | 第41页 |
| ·Fosmid文库质量鉴定 | 第41-42页 |
| ·Fosmid文库筛选酯酶 | 第42-43页 |
| ·亚克隆文库的构建与筛选 | 第43页 |
| ·酯酶基因序列分析 | 第43-44页 |
| ·分子进化树分析与氨基酸同源性比对 | 第44-46页 |
| ·本章小结 | 第46-47页 |
| 第3章 酯酶基因的异源表达和酶学性质研究 | 第47-60页 |
| ·前言 | 第47页 |
| ·实验材料 | 第47-49页 |
| ·菌株和质粒 | 第47页 |
| ·分子生物学操作试剂盒和工具酶 | 第47-48页 |
| ·引物序列 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48-49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49页 |
| ·实验方法 | 第49-54页 |
| ·亚克隆质粒和表达质粒的提取 | 第49-50页 |
| ·酯酶基因的克隆和载体构建 | 第50-51页 |
| ·酯酶的异源表达 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第51页 |
| ·酯酶的亲和层析纯化与浓缩 | 第51-52页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第52页 |
| ·酯酶EST4酶学性质研究 | 第52-54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-59页 |
| ·酯酶基因的异源表达与纯化 | 第54-55页 |
| ·酯酶EST4酶学性质研究 | 第55-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第4章 酯酶EST4不对称拆分手性醇的研究 | 第60-72页 |
| ·前言 | 第60页 |
| ·实验材料 | 第60-61页 |
| ·主要实验设备 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-64页 |
| ·酯酶EST4催化剂的制备 | 第61页 |
| ·酯酶EST4基于转酯化的拆分反应 | 第61-62页 |
| ·分析方法建立 | 第62页 |
| ·拆分效果的评价 | 第62-63页 |
| ·酯酶EST4拆分α-苯乙醇反应条件优化 | 第63-64页 |
| ·酯酶EST4拆分仲醇底物谱研究 | 第64页 |
| ·结果与讨论 | 第64-70页 |
| ·酯酶EST4拆分α-苯乙醇反应条件优化 | 第64-68页 |
| ·酯酶EST4动力学拆分仲醇底物谱研究 | 第68-69页 |
| ·高底物浓度下评价酯酶EST4拆分仲醇效果 | 第69-70页 |
| ·本章小结 | 第70-72页 |
| 第5章 酯酶EST4催化乙酸酯合成研究 | 第72-85页 |
| ·前言 | 第72-73页 |
| ·实验材料 | 第73-74页 |
| ·主要实验仪器 | 第73页 |
| ·主要试剂 | 第73-74页 |
| ·实验方法 | 第74-77页 |
| ·酯酶EST4催化剂的制备 | 第74页 |
| ·酯酶EST4催化合成乙酸酯类化合物反应 | 第74页 |
| ·反应条件对酯酶EST4催化合成乙酸桂酯的影响 | 第74-75页 |
| ·酯酶EST4催化合成乙酸酯化合物底物谱研究 | 第75页 |
| ·高底物浓度下评价酯酶EST4催化合成乙酸酯类化合物 | 第75页 |
| ·分析方法的建立 | 第75-77页 |
| ·结果与讨论 | 第77-84页 |
| ·酯酶EST4基于转酯反应合成乙酸桂酯条件优化 | 第78-82页 |
| ·底物谱研究 | 第82-83页 |
| ·高底物浓度合成乙酸酯类化合物 | 第83-84页 |
| ·本章小结 | 第84-85页 |
| 第6章 酯酶EST4固定化应用研究 | 第85-93页 |
| ·前言 | 第85-86页 |
| ·实验材料 | 第86页 |
| ·固定化载体 | 第86页 |
| ·试剂 | 第86页 |
| ·实验方法 | 第86-88页 |
| ·粗酶液的处理 | 第86页 |
| ·公式计算 | 第86-87页 |
| ·分析方法 | 第87页 |
| ·固定化载体的活化 | 第87页 |
| ·固定化的后处理 | 第87页 |
| ·酯酶EST4的固定化条件优化 | 第87-88页 |
| ·固定化酶操作稳定性研究 | 第88页 |
| ·检测方法 | 第88页 |
| ·结果与讨论 | 第88-91页 |
| ·粗酶液处理 | 第88-89页 |
| ·固定化载体的选择 | 第89页 |
| ·固定化条件优化 | 第89-91页 |
| ·固定化酶操作稳定性 | 第91页 |
| ·本章小结 | 第91-93页 |
| 第7章 结论与展望 | 第93-96页 |
| ·结论 | 第93-94页 |
| ·深海污泥宏基因组文库的构建及新型酯酶的筛选 | 第93页 |
| ·酯酶EST4动力学拆分制备手性仲醇 | 第93-94页 |
| ·酯酶EST4催化合成乙酸酯类化合物 | 第94页 |
| ·酯酶EST4固定化研究 | 第94页 |
| ·展望 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-109页 |
| 博士期间论文发表情况 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110页 |