| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| ·丁二酸简介 | 第10页 |
| ·产丁二酸微生物研究进展 | 第10-16页 |
| ·天然微生物 | 第10-11页 |
| ·非天然微生物（基因工程菌） | 第11-16页 |
| ·生物合成丁二酸的方法简介 | 第16-18页 |
| ·微生物发酵法 | 第16-17页 |
| ·微生物转化法 | 第17-18页 |
| ·本课题前期工作 | 第18页 |
| ·本课题研究意义 | 第18-19页 |
| ·主要研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-31页 |
| ·实验材料 | 第20-24页 |
| ·菌株、质粒与引物 | 第20-21页 |
| ·主要实验试剂 | 第21-22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·培养基及培养条件 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-30页 |
| ·嗜乙酰乙酸棒杆菌基因组的提取方法 | 第24页 |
| ·大肠杆菌与嗜乙酰乙酸棒杆菌质粒的提取方法 | 第24-25页 |
| ·PCR方法 | 第25-26页 |
| ·重组质粒构建方法 | 第26页 |
| ·大肠杆菌热激转化感受态的制备与转化方法 | 第26页 |
| ·嗜乙酰乙酸棒杆菌电激转化感受态的制备与转化方法 | 第26-27页 |
| ·嗜乙酰乙酸棒杆菌同源重组敲除实验流程 | 第27-28页 |
| ·三磷酸甘油醛脱氢酶酶活测定方法 | 第28页 |
| ·丙酮酸羧化酶酶活测定方法 | 第28-29页 |
| ·生长限制法合成丁二酸的方法 | 第29页 |
| ·两阶段法合成丁二酸的方法 | 第29-30页 |
| ·分析方法 | 第30-31页 |
| ·有机酸测定方法 | 第30页 |
| ·菌体生物量的测定 | 第30页 |
| ·残糖测定方法 | 第30-31页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第31-50页 |
| ·乙酸代谢途径的阻断研究 | 第31-38页 |
| ·pta-ackA，ctfA与aceE基因敲除质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·基因敲除菌株的构建与PCR验证 | 第32-34页 |
| ·基因pta与ackA敲除对C. acetoacidophilum产乙酸的影响 | 第34页 |
| ·基因ctfA、pta与ackA敲除对C. acetoacidophilum产乙酸的影响 | 第34-35页 |
| ·基因aceE敲除对C. acetoacidophilum产乙酸的影响 | 第35页 |
| ·乙酸代谢途径阻断对C. acetoacidophilum产酸时葡萄糖消耗的影响 | 第35-36页 |
| ·乙酸代谢阻断对C. acetoacidophilum产丁二酸的影响 | 第36-37页 |
| ·嗜乙酰乙酸棒杆菌乙酸合成途径的推断 | 第37-38页 |
| ·C. acetoacidophilum中基因gapA的过表达 | 第38-41页 |
| ·gapA过表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| ·重组蛋白的表达与SDS-PAGE分析 | 第39-40页 |
| ·三磷酸甘油醛脱氢酶酶酶活的验证 | 第40页 |
| ·gapA基因过表达对葡萄糖消耗与产酸的影响 | 第40-41页 |
| ·C. acetoacidophilum中基因pyc的过表达 | 第41-44页 |
| ·pyc过表达质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白的表达与SDS-PAGE分析 | 第43页 |
| ·丙酮酸羧化酶酶活的验证 | 第43-44页 |
| ·pyc基因过表达对产酸的影响 | 第44页 |
| ·C. acetoacidophilum ΔldhA/pXMJ19-pyc利用生长限制法合成丁二酸 | 第44-47页 |
| ·摇瓶中分批补料转化合成丁二酸 | 第45页 |
| ·3-L发酵罐上分批补料合成丁二酸 | 第45-46页 |
| ·3-L发酵罐上菌体重复利用合成丁二酸 | 第46-47页 |
| ·C. acetoacidophilum ΔldhA/pXMJ19-pyc利用两阶段法合成丁二酸 | 第47-50页 |
| ·三种培养基摇瓶中合成丁二酸的比较 | 第47-48页 |
| ·3-L发酵罐分批补料合成丁二酸 | 第48-50页 |
| 主要结论与展望 | 第50-52页 |
| 主要结论 | 第50-51页 |
| 展望 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第58页 |
