| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 前言 | 第7-15页 |
| ·反式4羟基-L-脯氨酸简介 | 第7-8页 |
| ·反式4羟基-L-脯氨酸的的生产方法 | 第8-10页 |
| ·生物组织提取法 | 第8页 |
| ·化学合成法 | 第8页 |
| ·微生物合成法 | 第8-10页 |
| ·产反式4羟基-L-脯氨酸大肠杆菌菌株的改造策略 | 第10-12页 |
| ·透明颤菌血红蛋白 | 第10-11页 |
| ·大肠杆菌中putA基因的作用及敲除方法 | 第11-12页 |
| ·国内外研究现状 | 第12-13页 |
| ·本课题研究意义和研究内容 | 第13-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-26页 |
| ·材料 | 第15-18页 |
| ·菌种与质粒 | 第15页 |
| ·主要酶及试剂 | 第15页 |
| ·仪器和设备 | 第15-16页 |
| ·引物 | 第16-17页 |
| ·培养基 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·方法 | 第18-26页 |
| ·大肠杆菌化转感受态细胞的制备及转化 | 第18页 |
| ·共表达质粒pUHVT4 的构建及vgb基因对羟脯氨酸生产的影响 | 第18-19页 |
| ·培养基的优化 | 第19-20页 |
| ·重组大肠杆菌产羟脯氨酸的补料分批培养 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌putA基因的敲除 | 第21-23页 |
| ·putA基因的缺失及vgb基因对脯氨酸转化及羟脯氨酸产量的影响 | 第23页 |
| ·反式4羟基-L-脯氨酸浓度的定量测定 | 第23-24页 |
| ·脯氨酸含量的定量测定 | 第24-25页 |
| ·葡萄糖浓度的定量测定 | 第25-26页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第26-48页 |
| ·vgb基因在大肠杆菌中的克隆表达及对羟脯氨酸生产的影响 | 第26-29页 |
| ·vgb基因与脯氨酸4羟化酶基因共表达载体的构建 | 第26-27页 |
| ·CO差光谱法检测透明颤菌血红蛋白活性 | 第27-28页 |
| ·vgb基因对羟脯氨酸产量的影响 | 第28-29页 |
| ·培养基的摇瓶发酵优化 | 第29-38页 |
| ·单因素优化实验 | 第30-33页 |
| ·正交实验 | 第33-35页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)/pUHVT4 在GT与GC培养基中的生长及羟脯氨酸产量 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3)/pUHVT4 在GC培养基中的补料分批培养 | 第36-38页 |
| ·大肠杆菌W3110 和BL21(DE3)中putA基因的敲除 | 第38-41页 |
| ·线性打靶片段的获得 | 第38-39页 |
| ·putA基因的敲除 | 第39-40页 |
| ·野生型菌株及putA基因缺失型菌株对脯氨酸的消耗比较 | 第40-41页 |
| ·putA基因的缺失及vgb基因对羟脯氨酸产量的影响 | 第41-48页 |
| ·putA基因的缺失对脯氨酸有效转化率及羟脯氨酸产量的影响 | 第41-43页 |
| ·vgb基因在putA基因缺失型菌株中对羟脯氨酸产量的影响 | 第43-45页 |
| ·大肠杆菌BL21(DE3) ΔputA/pUHVT4 在GC和GT培养基中的补料分批发酵 | 第45-48页 |
| 结论与展望 | 第48-50页 |
| 主要结论 | 第48页 |
| 展望 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第55页 |
