| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-17页 |
| ·观赏凤梨的研究进展 | 第10页 |
| ·生物技术在凤梨科植物中的应用 | 第10-12页 |
| ·组织培养技术在凤梨科植物生产上的应用 | 第10-11页 |
| ·转基因技术在凤梨科植物生产上的应用 | 第11页 |
| ·凤梨科植物的种质资源保存技术 | 第11-12页 |
| ·遗传转化 | 第12页 |
| ·植物基因工程技术 | 第12-14页 |
| ·CaMV35S-GUS-ANR转化姬凤梨 | 第14-15页 |
| ·GUS报告基因 | 第14页 |
| ·ANR基因功能研究 | 第14-15页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第15-16页 |
| ·本研究的技术路线 | 第16-17页 |
| 2 材料方法 | 第17-29页 |
| ·试验材料 | 第17页 |
| ·植物材料 | 第17页 |
| ·试剂与药品 | 第17页 |
| ·菌种和质粒 | 第17页 |
| ·试验方法 | 第17-19页 |
| ·红掌总RNA的提取 | 第17-18页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第18-19页 |
| ·红掌ANR基因的全长序列扩增 | 第19页 |
| ·ANR基因目标片段的回收、连接、转化以及测序 | 第19-24页 |
| ·目标片段的胶回收操作过程包括以下步骤 | 第19-20页 |
| ·大肠杆菌DH5α菌株感受态的制备步骤包括以下内容 | 第20页 |
| ·将回收的目标片段与克隆载体PMD-18T连接 | 第20页 |
| ·将目标片段连接后的产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第20-21页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞RCR检测 | 第21-22页 |
| ·红掌ANR基因植物表达载体的构建 | 第22页 |
| ·菌液重组质粒DNA的提取 | 第22页 |
| ·农杆菌感受态的制备过程 | 第22-23页 |
| ·将构建好的植物表达载体转入农杆菌感受态细胞并检测转化情况 | 第23-24页 |
| ·试验中所用到的仪器设备 | 第24页 |
| ·试验中各培养基的配方 | 第24-25页 |
| ·试验中主要试剂配制方法 | 第25-26页 |
| ·遗传转化过程中农杆菌侵染液及抗生素浓度的筛选 | 第26-27页 |
| ·姬凤梨的遗传转化和植株的再生 | 第27-28页 |
| ·农杆菌侵染液的配制 | 第27页 |
| ·姬凤梨叶片的遗传转化 | 第27-28页 |
| ·姬凤梨转基因植株的检测 | 第28-29页 |
| ·转基因姬凤梨叶片GUS组织化学染色检测 | 第28页 |
| ·转基因姬凤梨分子检测 | 第28-29页 |
| 3. 结果与分析 | 第29-47页 |
| ·红掌佛焰苞组织总RNA的提取 | 第29页 |
| ·红掌ANR基因全长PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·ANR基因生物信息学分析 | 第30-32页 |
| ·ANR基因PCR产物与克隆载体PMD-18T连接 | 第32-33页 |
| ·重组质粒PMD-18T-ANR的提取及酶切鉴定 | 第33页 |
| ·PMD-18T-ANR质粒酶切产物与表达载体酶切产物的连接 | 第33-34页 |
| ·重组质粒CaMV35S-GUS-ANR的提取及酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·表达载体CaMV35S-GUS-ANR转化农杆菌 | 第35页 |
| ·姬凤梨组织培养过程 | 第35-36页 |
| ·姬凤梨叶片基部愈伤组织诱导培养基的优化 | 第36-37页 |
| ·姬凤梨叶片基部愈伤组织诱导出芽培养基的优化 | 第37-38页 |
| ·姬凤梨遗传转化体系的建立 | 第38-42页 |
| ·G418抗生素的最佳浓度确定 | 第38-39页 |
| ·农杆菌菌液浓度对姬凤梨遗传转化的影响 | 第39页 |
| ·浸染时间对于姬凤梨叶片遗传转化的影响 | 第39-40页 |
| ·羧苄青霉素的浓度对于姬凤梨叶片芽分化效率的影响 | 第40-41页 |
| ·乙酰丁香酮(AS)的浓度对于姬凤梨叶片遗传转化的影响 | 第41-42页 |
| ·转基因和非转基因姬凤梨叶片GUS组织化学染色 | 第42-43页 |
| ·转基因姬凤梨DNA水平上的PCR分子检测 | 第43-44页 |
| ·转基因姬凤梨RNA水平上的RT-PCR分子检测 | 第44-45页 |
| ·转基因姬凤梨的表型观察 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-52页 |
| ·组织培养技术在凤梨科植物中的应用及在遗传转化中的作用 | 第47页 |
| ·继代次数的多少对于姬凤梨不定芽增殖的影响 | 第47-48页 |
| ·影响姬凤梨遗传转化的因素 | 第48-50页 |
| ·农杆菌菌株对植物遗传转化的影响 | 第48页 |
| ·侵染时间对于姬凤梨遗传转化的影响 | 第48-49页 |
| ·菌液浓度对于姬凤梨遗传转化的影响 | 第49页 |
| ·共培养时间对于姬凤梨遗传转化的影响 | 第49页 |
| ·羧苄青霉素(Car)的浓度对于姬凤梨遗传转化的影响 | 第49-50页 |
| ·转化体的筛选对遗传转化效率的影响 | 第50页 |
| ·外源基因的瞬时表达与稳定表达 | 第50-51页 |
| ·本实验中需要注意的细节问题 | 第51-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 6 下一步研究计划 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 缩略词表 | 第58-59页 |
| 附录A | 第59-60页 |
| 附录B | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
