| 致谢 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-22页 |
| 1 猪繁殖与呼吸综合征研究进展 | 第14-18页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征 | 第14页 |
| ·PRRSV 分子生物学研究进展 | 第14-17页 |
| ·PRRSV 的形态学特征 | 第14-15页 |
| ·PRRSV 编码的结构蛋白及其功能 | 第15-16页 |
| ·PRRSV 编码的非结构蛋白及其功能 | 第16-17页 |
| ·PRRSV 的致病机制 | 第17页 |
| ·PRRSV 的免疫调节与免疫逃逸机制 | 第17-18页 |
| ·干扰素 | 第17页 |
| ·细胞因子 | 第17-18页 |
| ·抗原递呈 | 第18页 |
| ·PRRSV 可引起细胞凋亡 | 第18页 |
| 2 RNAi 的研究进展 | 第18-20页 |
| ·RNAi 的作用机制 | 第18-19页 |
| ·RNAi 的特点 | 第19-20页 |
| ·RNAi 的 PTGS 机制 | 第19页 |
| ·RNAi 具有高度的特异性 | 第19页 |
| ·RNAi 具有高度的稳定性 | 第19页 |
| ·RNAi 具有高度的活性 | 第19页 |
| ·RNAi 具有浓度依赖性 | 第19-20页 |
| ·RNAi 具有双干扰系统 | 第20页 |
| ·RNAi 具有可传播性 | 第20页 |
| ·RNAi 的应用 | 第20页 |
| ·RNAi 在研究基因功能方面的应用 | 第20页 |
| ·RNAi 在治疗人类疾病方面的应用 | 第20页 |
| 3 RNAi 在抗 PRRSV 方面的研究进展 | 第20-21页 |
| ·microRNA（miRNA）对 PRRSV 的抑制 | 第20-21页 |
| ·RNAi 对 PRRSV 的抑制 | 第21页 |
| 4 本研究的目的意义 | 第21-22页 |
| 引言 | 第22-23页 |
| 第二章 在 293T 细胞上构建干扰模型及其干扰效果的鉴定 | 第23-37页 |
| 1 材料 | 第23-25页 |
| ·细胞、质粒及载体 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要试剂的配制 | 第23-24页 |
| ·LB 培养基的配制 | 第23页 |
| ·氨苄青霉素的配制 | 第23页 |
| ·无血清 DMEM 营养基的配制 | 第23页 |
| ·PBS（磷酸盐缓冲液）、PBST（磷酸盐吐温缓冲液）的配制 | 第23页 |
| ·0.4% EDTA 储存液的配制 | 第23-24页 |
| ·5%胰酶溶液的配制 | 第24页 |
| ·2%,10% FBS DMEM 培养基的配制 | 第24页 |
| ·30%聚丙烯酰胺的配制 | 第24页 |
| ·10%十二烷基硫酸钠 SDS 溶液的配制 | 第24页 |
| ·分离胶缓冲液的配制 | 第24页 |
| ·浓缩胶缓冲液的配制 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE 加样缓冲液的配制 | 第24页 |
| ·Tris-甘氨酸电泳缓冲液的配制 | 第24页 |
| ·转膜缓冲液的配制 | 第24页 |
| ·5%脱脂奶的配制 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·siRNA 序列 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-30页 |
| ·重组质粒 pcDNA3.1-nsp1α-GFP、pcDNA3.1-nsp11-GFP 的提取 | 第25-26页 |
| ·利用 siRNA 对重组质粒 pcDNA3.1-nsp1α-GFP、pcDNA3.1-nsp11-GFP 干扰 | 第26-30页 |
| 3 结果 | 第30-35页 |
| ·荧光倒置显微镜对 siRNA 抑制重组质粒表达效果的检测 | 第30-34页 |
| ·Western Blot 对 siRNA 抑制重组质粒表达效果的检测 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 在 MARC-145 细胞上构建干扰模型及其干扰效果的鉴定 | 第37-43页 |
| 1 材料 | 第37页 |
| ·细胞、质粒及毒株 | 第37页 |
| ·试剂和抗体 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-38页 |
| ·重组 pcDNA3.1-nsp1α-GFP、pcDNA3.1-nsp11-GFP 质粒的提取 | 第37页 |
| ·利用 siRNA 在 MARC-145 细胞上对重组质粒 pcDNA3.1-nsp1α-GFP 、pcDNA3.1-nsp11-GFP 干扰 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-41页 |
| ·MARC-145 细胞中 siRNA 对重组质粒表达的抑制 | 第38-40页 |
| ·PRRSV 对共转染 MARC-145 细胞的感染 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| ·MARC-145 细胞中荧光倒置显微镜对 siRNA 抑制重组质粒表达效果的检测 | 第41页 |
| ·间接免疫荧光试验（IFA）检测 siRNA 对 PRRSV 病毒复制的抑制 | 第41-43页 |
| 第四章 重组质粒 pcDNA3.1-nsp1α-GFP、pcDNA3.1-nsp11-GFP 转染 MARC-145 细胞对PRRSV 复制的影响 | 第43-48页 |
| 1 材料 | 第43页 |
| ·细胞、质粒及毒株 | 第43页 |
| ·主要试剂的配制 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-45页 |
| ·siRNA 和重组质粒 pcDNA3.1-nsp1α-GFP、pcDNA3.1-nsp11-GFP 分别共转染MARC-145 细胞 | 第43页 |
| ·重组质粒 pcDNA3.1-nsp1α-GFP、pcDNA3.1-nsp11-GFP 分别共转染 MARC-145细胞 | 第43-44页 |
| ·PRRSV 作用于转染后的 MARC-145 细胞 | 第44页 |
| ·PRRSV 的培养 | 第44页 |
| ·TCID_(50)的测定 | 第44-45页 |
| ·细胞的培养 | 第44-45页 |
| ·PRRSV 的稀释 | 第45页 |
| ·接种细胞培养板 | 第45页 |
| ·判断 | 第45页 |
| ·TCID_(50)的计算 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-47页 |
| ·重组质粒 pcDNA3.1-nsp1α-GFP 的表达对 PRRSV 复制的影响 | 第45-46页 |
| ·重组质粒 pcDNA3.1-nsp11-GFP 的表达对 PRRSV 复制的影响 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 全文总结 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
