| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-21页 |
| 引言 | 第9页 |
| 1 水稻花药发育相关基因研究进展 | 第9-11页 |
| ·减数分裂相关基因的研究 | 第9-10页 |
| ·绒毡层发育相关基因的研究 | 第10页 |
| ·花粉壁形成相关基因的研究 | 第10页 |
| ·花药开裂相关基因的研究 | 第10-11页 |
| ·代谢相关基因的研究 | 第11页 |
| 2 活性氧概述 | 第11-14页 |
| ·活性氧的产生 | 第11页 |
| ·活性氧的功能 | 第11-12页 |
| ·活性氧的毒害作用 | 第11-12页 |
| ·活性氧参与植物生长发育 | 第12页 |
| ·活性氧参与程序性细胞死亡 | 第12页 |
| ·ROS动态平衡系统 | 第12-13页 |
| ·活性氧的生成系统 | 第12-13页 |
| ·活性氧的清除系统 | 第13页 |
| ·活性氧信号的检测 | 第13-14页 |
| ·高效液相色谱法 | 第13页 |
| ·分光光度法 | 第13-14页 |
| ·组织化学定位法 | 第14页 |
| 3 植物Rboh基因研究进展 | 第14-17页 |
| ·植物Rboh基因的功能 | 第15页 |
| ·参与胁迫反应 | 第15页 |
| ·调控植物生长发育 | 第15页 |
| ·植物Rboh活性的调节机制 | 第15-17页 |
| ·Rac蛋白参与Rboh活性调控 | 第16页 |
| ·Ca~(2+)和磷酸化参与Rboh活性调控 | 第16-17页 |
| 4 RNAi与artificial microRNA | 第17-19页 |
| ·RNAi | 第17页 |
| ·artificial microRNA | 第17-19页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 水稻OsRboh1基因的原位杂交 | 第21-37页 |
| 1 实验材料 | 第21-22页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌种与载体 | 第21页 |
| ·酶与相关试剂 | 第21页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| ·分析软件 | 第21-22页 |
| 2 试验方法 | 第22-30页 |
| ·OsRboh1基因原位杂交载体构建 | 第22-25页 |
| ·水稻总RNA提取 | 第22页 |
| ·反转录cDNA第一链 | 第22页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·琼脂糖凝胶回收 | 第23页 |
| ·PCR产物连接pGEM-T载体 | 第23页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞制备 | 第23-24页 |
| ·热激法转化感受态细胞 | 第24页 |
| ·质粒的抽提 | 第24页 |
| ·原位杂交载体构建 | 第24-25页 |
| ·OsRboh1基因的原位杂交 | 第25-30页 |
| ·水稻材料的选取 | 第25页 |
| ·石蜡切片 | 第25-26页 |
| ·探针模板的线性化 | 第26-27页 |
| ·探针的标记 | 第27页 |
| ·杂交 | 第27-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-35页 |
| ·OsRboh1原位杂交探针片段的选择 | 第30-31页 |
| ·OsRboh1原位杂交探针片段的克隆 | 第31-32页 |
| ·OsRboh1原位杂交载体的构建 | 第32-34页 |
| ·OsRboh1原位杂交探针的制备 | 第34-35页 |
| ·探针模板的线性化 | 第34页 |
| ·探针的转录 | 第34-35页 |
| ·原位杂交 | 第35页 |
| 5 小结与讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 OsRboh1过表达载体构建与遗传转化 | 第37-47页 |
| 1 实验材料 | 第37页 |
| ·植物材料 | 第37页 |
| ·菌种与载体 | 第37页 |
| ·酶与化学试剂 | 第37页 |
| ·仪器设备 | 第37页 |
| ·分析软件 | 第37页 |
| 2 试验方法 | 第37-40页 |
| ·水稻OsRboh1过表达载体构建 | 第37-39页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·琼脂糖凝胶回收 | 第38页 |
| ·PCR产物连接pGEM-T载体 | 第38页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞制备 | 第38页 |
| ·热激法转化感受态细胞 | 第38页 |
| ·质粒的抽提 | 第38页 |
| ·过表达载体构建 | 第38页 |
| ·农杆菌GV3101与EHA105感受态制备 | 第38-39页 |
| ·电击转化农杆菌 | 第39页 |
| ·喷雾法侵染拟南芥 | 第39-40页 |
| ·拟南芥的准备 | 第39页 |
| ·侵染拟南芥 | 第39-40页 |
| ·拟南芥转基因阳性植株筛选 | 第40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-46页 |
| ·OsRboh1 cDNA全长的序列选择 | 第40-41页 |
| ·T-OsRboh1-OE的构建 | 第41-42页 |
| ·pCAMBIA1301-OsRboh1过表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·pCAMBIA1301-OsRboh1-OE农杆菌转化与鉴定 | 第43-44页 |
| ·拟南芥的遗传转化与筛选 | 第44-46页 |
| 4 小结与讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 水稻OsRboh1 RNAi与amiRNA表达载体构建 | 第47-55页 |
| 1 实验材料 | 第47页 |
| ·菌种与载体 | 第47页 |
| ·酶与相关试剂 | 第47页 |
| ·仪器设备 | 第47页 |
| ·分析软件 | 第47页 |
| 2 试验方法 | 第47-54页 |
| ·水稻OsRboh1 RNAi表达载体构建 | 第47-50页 |
| ·RNA干扰区段的选择 | 第47页 |
| ·OsRboh1-RNAi区段的设计 | 第47-49页 |
| ·pUbi：：OsRboh1-RNAi载体构建 | 第49-50页 |
| ·水稻OsRboh1 artificial microRNA表达载体构建 | 第50-54页 |
| ·WMD3对OsRboh1 amiRNA的预测 | 第50-51页 |
| ·amiRNA与amiRNA*对OsmiR528的替换 | 第51-54页 |
| ·pCaMV35S：：OsRboh1-amiRNA-1,2,3载体构建 | 第54页 |
| ·pUbi：：OsRboh1-RNAi与pCaMV35S：：OsRboh1-amiRNA-1,2,3农杆菌转化 | 第54页 |
| 4 小结 | 第54-55页 |
| 第五章 全文总结与研究展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 附录1 | 第63-64页 |
| 附录2 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
