| 附件 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-36页 |
| ·禽白血病 | 第18页 |
| ·我国 J 亚群禽白血病的流行情况 | 第18-19页 |
| ·J 亚群禽白血病病毒 | 第19-24页 |
| ·病毒的分类地位 | 第19页 |
| ·病毒的形态与理化特性 | 第19-20页 |
| ·病毒的基因组结构及蛋白组成 | 第20-21页 |
| ·病毒复制周期 | 第21-23页 |
| ·病毒致病致瘤机制 | 第23-24页 |
| ·血管内皮生长及其受体与肿瘤发生 | 第24-26页 |
| ·血管内皮生长因子 A 与血管生成 | 第24页 |
| ·血管内皮生长因子受体 2 与血管生成 | 第24-25页 |
| ·血管生成与肿瘤发生 | 第25-26页 |
| ·p53 与病毒及肿瘤 | 第26-30页 |
| ·认知 p53 | 第26-27页 |
| ·p53 基因突变与肿瘤 | 第27-28页 |
| ·病毒与 p53 | 第28-29页 |
| ·p53 与病毒引起的禽类肿瘤 | 第29-30页 |
| ·microRNAs 与反转录病毒 | 第30-34页 |
| ·microRNAs 的发现与命名 | 第30页 |
| ·microRNAs 的生成与调控机制 | 第30-33页 |
| ·microRNAs 与反转录病毒 | 第33-34页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第34-36页 |
| 第二章 我国 ALV-J 遗传演化分析 | 第36-48页 |
| ·实验材料 | 第36-37页 |
| ·载体、菌株和细胞 | 第36页 |
| ·临床样品 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-39页 |
| ·病毒分离与前病毒 DNA 提取 | 第37页 |
| ·病毒基因克隆与测序 | 第37-38页 |
| ·DNA 序列比对及进化树分析 | 第38-39页 |
| ·实验结果 | 第39-45页 |
| ·ALV-J 的病毒分离及鉴定 | 第39-41页 |
| ·ALV-J env 基因的遗传演化分析 | 第41-42页 |
| ·ALV-J U3 的进化分析 | 第42-43页 |
| ·ALV-J 3’UTR 的进化分析 | 第43-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·小结 | 第46-48页 |
| 第三章 3’UTR 205nt 缺失增强 ALV-J 致病性 | 第48-63页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·载体、菌株和细胞 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48-49页 |
| ·实验方法 | 第49-52页 |
| ·ALV-J 感染性克隆构建策略 | 第49-50页 |
| ·病毒拯救和鉴定 | 第50页 |
| ·拯救病毒的体外复制动力学 | 第50-51页 |
| ·p27 蛋白表达和反转录酶活性鉴定 | 第51页 |
| ·亚病毒基因组构建 | 第51-52页 |
| ·亚病毒基因组中 p27 蛋白的表达和未剪切 RNA 的核质穿梭 | 第52页 |
| ·拯救病毒的体内致病性 | 第52页 |
| ·数据分析 | 第52页 |
| ·实验结果 | 第52-60页 |
| ·拯救缺失 205nt 和嵌合 205nt 的两株 ALV-J 病毒 | 第52-54页 |
| ·205nt 缺失增强 ALV-J 在血管内皮细胞中的复制 | 第54-56页 |
| ·205nt 缺失促进 ALV-J 未剪切 RNA 从细胞核输出到细胞质 | 第56-57页 |
| ·205nt 缺失增强 ALV-J 在体内的复制 | 第57-58页 |
| ·205nt 缺失增强 ALV-J 致瘤性和致死率 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第四章 ALV-J 致病性增强的分子机制 | 第63-89页 |
| ·实验材料 | 第63-64页 |
| ·载体、菌株和细胞 | 第63-64页 |
| ·主要试剂 | 第64页 |
| ·主要仪器 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64-73页 |
| ·VEGF-A 和 VEGFR-2 表达 | 第64-65页 |
| ·ALV-J 病毒载量及其插入位点的鉴定 | 第65-66页 |
| ·p21WAF1的表达和 p53 表达载体的构建 | 第66页 |
| ·DF-1 原型 p53 蛋白和突变型 p53 蛋白的细胞定位 | 第66-67页 |
| ·U3 介导的报告基因载体和亚病毒基因组构建 | 第67-68页 |
| ·亚病毒基因组中 p27 蛋白的表达和未剪切 RNA 的核质穿梭 | 第68页 |
| ·染色体免疫共沉淀（CHIP）验证 p53 蛋白与 ALV-J U3 互作 | 第68-70页 |
| ·凝胶阻滞试验（EMSA）验证 p53 蛋白与 U3 互作作用域 | 第70-73页 |
| ·数据分析 | 第73页 |
| ·实验结果 | 第73-85页 |
| ·ALV-J 致瘤组织中 VEGF-A 及其受体 VEGFR-2 高水平表达 | 第73-74页 |
| ·VEGF-A 和 VEGFR-2 表达水平与 ALV-J 复制呈正相关 | 第74-77页 |
| ·ALV-J 持续感染致 TP53 基因突变 | 第77-78页 |
| ·DF-1 细胞中原型 p53 蛋白抑制 ALV-J U3 活性 | 第78-83页 |
| ·突变型 p53 蛋白失去对抑制 ALV-J 复制的作用 | 第83-85页 |
| ·ALV-J 感染 DF-1 细胞增加 DF-1 原型 p53 蛋白表达 | 第85页 |
| ·讨论 | 第85-87页 |
| ·小结 | 第87-89页 |
| 第五章 宿主 miRNAs 在 ALV-J 致病过程中的作用 | 第89-107页 |
| ·实验材料 | 第89-90页 |
| ·载体、菌株，毒株和细胞 | 第89页 |
| ·主要试剂 | 第89页 |
| ·主要仪器 | 第89-90页 |
| ·实验方法 | 第90-93页 |
| ·预测 ALV-J 基因组编码 miRNAs 的预测 | 第90页 |
| ·预测 ALV-J 编码 miRNAs 前体分子的验证 | 第90-91页 |
| ·原型及突变型报告基因的构建和检测 | 第91页 |
| ·预测 miRNA 与靶标的结合 | 第91页 |
| ·宿主 miRNAs 抑制子和表达载体的构建 | 第91-92页 |
| ·宿主 miRNAs 的 Northern Blot 验证 | 第92页 |
| ·原型 ALV-J 和突变型 ALV-J 的拯救 | 第92页 |
| ·ALV-J p27 蛋白的表达及病毒复制 | 第92-93页 |
| ·宿主 gga-miR-1650 茎环法荧光定量 PCR 检测 | 第93页 |
| ·数据分析 | 第93页 |
| ·实验结果 | 第93-105页 |
| ·ALV-J 基因组中 miRNAs 前体分子预测 | 第93-94页 |
| ·Northern Blot 检测不到预测的 ALV-J 编码的前体分子 | 第94页 |
| ·DF-1 细胞中可能存在 miRNAs 调控 ALV-J 5’UTR 介导的报告基因活性 | 第94-96页 |
| ·gga-miR-1650 调控 5’UTR 介导的报告基因活性 | 第96-98页 |
| ·ALV-J 5’UTR 是 gga-miR-1650 的靶标 | 第98-101页 |
| ·过表达 gga-miR-1650 抑制 ALV-J 蛋白表达和病毒复制 | 第101-103页 |
| ·ALV-J 感染引起细胞 gga-miR-1650 表达上调 | 第103-105页 |
| ·讨论 | 第105-106页 |
| ·小结 | 第106-107页 |
| 第六章 全文结论 | 第107-108页 |
| 参考文献 | 第108-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
| 作者简历 | 第123-124页 |
