| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-27页 |
| ·P450 BM-3的研究进展 | 第14-17页 |
| ·细胞色素P450酶系的概况 | 第14-15页 |
| ·细胞色素P450 BM-3 | 第15-16页 |
| ·细胞色素P450 BM-3的改造 | 第16-17页 |
| ·靛蓝 | 第17-19页 |
| ·靛蓝的结构与性质 | 第17-18页 |
| ·靛蓝的生产方法 | 第18-19页 |
| ·酶分子体外改造研究进展 | 第19-23页 |
| ·定向进化 | 第20-21页 |
| ·理性改造 | 第21-22页 |
| ·半理性改造 | 第22页 |
| ·针对靛蓝生产的P450酶的分子改造 | 第22-23页 |
| ·提高酶的热稳定性的研究进展 | 第23-25页 |
| ·蛋白质热稳定的分类 | 第23页 |
| ·蛋白质热稳定性的影响因素 | 第23页 |
| ·理性设计提高蛋白质热稳定性的方法 | 第23-25页 |
| ·本课题的研究思路和目标 | 第25-27页 |
| ·研究目标 | 第25页 |
| ·技术路线图 | 第25-26页 |
| ·研究内容 | 第26-27页 |
| 第2章 P450 BM-3热稳定性的半理性改造 | 第27-42页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·实验材料 | 第27-29页 |
| ·菌种与质粒 | 第27-28页 |
| ·化学试剂 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·主要仪器与设备 | 第28-29页 |
| ·DNA测序及引物合成 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-33页 |
| ·质粒的提取 | 第29-30页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·改造位点的选取 | 第30页 |
| ·饱和突变文库的构建 | 第30页 |
| ·突变酶的筛选 | 第30-31页 |
| ·突变酶的序列测定与表达 | 第31页 |
| ·突变酶的表达与纯化 | 第31页 |
| ·酶动力学参数测定 | 第31-32页 |
| ·电子耦合率测定 | 第32页 |
| ·域选择性测定 | 第32页 |
| ·突变酶的最适温度测定 | 第32-33页 |
| ·突变酶的热稳定性参数测定 | 第33页 |
| ·突变酶三维结构建模 | 第33页 |
| ·实验结果与讨论 | 第33-40页 |
| ·突变位点的选取 | 第33-34页 |
| ·突变文库筛选 | 第34-35页 |
| ·突变酶最适温度测定 | 第35-36页 |
| ·酶动力学 | 第36页 |
| ·电子耦合率 | 第36-37页 |
| ·域选择性 | 第37页 |
| ·热稳定参数 | 第37-39页 |
| ·突变酶结构与功能分析 | 第39-40页 |
| ·本章小结 | 第40-42页 |
| 第3章 P450 BM-3饱和突变文库的构建与筛选 | 第42-52页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42页 |
| ·菌种与质粒 | 第42页 |
| ·化学试剂 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42页 |
| ·主要仪器与设备 | 第42页 |
| ·DNA测序及引物合成 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-44页 |
| ·质粒的提取 | 第43页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第43页 |
| ·饱和突变文库的构建与筛选 | 第43页 |
| ·突变酶的表达与纯化 | 第43页 |
| ·突变酶浓度的测定 | 第43页 |
| ·突变酶比活力的测定 | 第43-44页 |
| ·电子耦合率测定 | 第44页 |
| ·突变酶最适温度测定 | 第44页 |
| ·突变酵最适温度测定 | 第44页 |
| ·实验结果与讨论 | 第44-51页 |
| ·突变酶的筛选与表达 | 第44-47页 |
| ·突变酶催化性能分析 | 第47-48页 |
| ·突变酶动力学参数分析 | 第48-49页 |
| ·突变酶电子耦合率分析 | 第49-50页 |
| ·突变酶最适反应温度分析 | 第50-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 第4章 P450 BM-3对甾体底物催化选择性的半理性改造 | 第52-61页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·菌种与质粒 | 第52-53页 |
| ·工具酶 | 第53页 |
| ·化学试剂 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·主要仪器与设备 | 第53页 |
| ·DNA测序及引物合成 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-55页 |
| ·改造方法的确定 | 第53-54页 |
| ·质粒的提取 | 第54页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第54页 |
| ·突变酶的构建 | 第54-55页 |
| ·突变酶的表达与纯化 | 第55页 |
| ·突变酶的催化性能 | 第55页 |
| ·突变酶三维结构建模 | 第55页 |
| ·突变酶三绝结构建模 | 第55页 |
| ·实验结果与讨论 | 第55-59页 |
| ·改造位点及改造方式的确定 | 第55-58页 |
| ·突变酶构建结果分析 | 第58页 |
| ·突变酶催化性能分析 | 第58-59页 |
| ·本章小结 | 第59-61页 |
| 第5章 结论与展望 | 第61-63页 |
| ·结论 | 第61-62页 |
| ·展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-74页 |
| 作者简历 | 第74页 |