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花生油脂合成关键酶基因GPAT9和LPAAT的分子特征及在籽仁中的表达分析

中文摘要第1-11页
Abstract第11-14页
1 前言第14-23页
   ·植物油脂的合成途径第14-16页
   ·甘油-3-磷酸酰基转移酶基因(GPAT)的研究进展第16-17页
   ·溶血磷脂酸酰基转移酶基因(LPAAT)的研究进展第17-19页
   ·二酰甘油酰基转移酶基因(DGAT)的研究进展第19-20页
   ·花生栽培种的起源研究第20-22页
     ·花生区组的来源和染色体特点第20-21页
     ·花生栽培种与二倍体野生种间亲缘关系的研究进展第21-22页
   ·本研究的目的意义第22-23页
2 材料与方法第23-37页
   ·花生 GPAT9 和 LPAAT 的克隆试验第23-30页
     ·植物材料第23-24页
       ·克隆 GPAT9 所用材料第23页
       ·克隆 LPAAT 所用材料第23-24页
     ·主要试剂第24页
     ·试验方法第24-30页
       ·引物设计第24页
       ·取样方法第24页
       ·籽仁 RNA 提取及 cDNA 合成第24-25页
       ·总 RNA 及其逆转录产物的检测第25-26页
       ·花生 GPAT9 和 LPAAT cDNA 序列的 PCR 扩增第26-27页
       ·花生叶片基因组 DNA 的提取第27页
       ·花生 GPAT9 和 LPAAT DNA 序列的 PCR 扩增第27-28页
       ·PCR 产物的胶回收第28-29页
       ·目的片段与 pEASY-T1 载体连接并转化大肠杆菌第29页
       ·取阳性重组子测序第29-30页
       ·序列生物信息学分析第30页
   ·花生种子 AhGPAT9 的表达差异检测第30-32页
     ·试验材料第30-31页
     ·试验方法第31-32页
       ·花生种子含油量的测定第31页
       ·实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)引物设计第31-32页
       ·qRT-PCR 反应及数据处理第32页
   ·GPAT9 表达载体的构建第32-37页
     ·菌种和质粒第32页
     ·酶和试剂第32-33页
     ·试验方法第33-37页
       ·PCR 引物第33页
       ·质粒 DNA 的提取第33页
       ·双酶切目的片段与 pGBVE 质粒大片段第33-34页
       ·连接目的片段与质粒大片段第34页
       ·连接体转化大肠杆菌感受态细胞第34页
       ·重组质粒的筛选与鉴定第34页
       ·感受态农杆菌 LBA4404 的制备第34-35页
       ·重组质粒转入农杆菌感受态细胞并筛选鉴定第35-37页
3 结果与分析第37-52页
   ·花生种子含油量分析第37页
   ·花生 GPAT9 的克隆及分析第37-44页
     ·籽仁总 RNA 及 cDNA 的电泳检测第37-38页
     ·AhGPAT9 的核苷酸序列分析第38-39页
     ·AhGPAT9 推导的氨基酸序列分析第39-42页
     ·不同花生品种籽仁 AhGPAT9 的表达差异分析第42-44页
     ·AhGPAT9 植物超表达载体构建第44页
   ·花生 LPAAT 的克隆及分析第44-52页
     ·LPAAT 的核苷酸序列分析第44-50页
     ·LPAAT 蛋白的生物信息学分析第50-51页
     ·栽培种与野生种 LPAAT 核苷酸序列的系统进化分析第51-52页
4 讨论第52-56页
   ·不同花生栽培品种 AhGPAT9 的等位变异分析第52页
   ·花生种子发育过程中 AhGPAT9 的相对表达量与品种含油量的相关性分析第52页
   ·花生 LPAAT 的序列分析第52-53页
   ·花生 GPAT 蛋白的跨膜结构第53-54页
   ·关于本试验取样时期设计的问题第54页
   ·植物表达载体的构建意义及注意事项第54-56页
5 结论第56-57页
参考文献第57-64页
附录第64-66页
致谢第66-67页
攻读学位期间发表论文情况第67页

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