| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 英文缩写表 | 第11-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-23页 |
| 引言 | 第13页 |
| ·丁香假单胞菌 | 第13-16页 |
| ·假单胞菌 | 第13-14页 |
| ·丁香假单胞菌 | 第14-16页 |
| ·Ⅲ型分泌系统 | 第16-18页 |
| ·Ⅲ型分泌系统简介 | 第16-17页 |
| ·Ⅲ型分泌系统与丁香假单胞菌 | 第17-18页 |
| ·单链抗体技术 | 第18-20页 |
| ·抗体技术的发展 | 第18-19页 |
| ·单链抗体 | 第19-20页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第20-21页 |
| ·植物抗体 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-51页 |
| ·实验材料 | 第23-30页 |
| ·菌株及载体 | 第23页 |
| ·PCR引物 | 第23-25页 |
| ·仪器设备 | 第25-26页 |
| ·材料与试剂 | 第26-27页 |
| ·主要试剂配方 | 第27-30页 |
| ·实验方法 | 第30-51页 |
| ·E.coli BL21/pGEX-6p-1-hrpA载体的构建 | 第30-35页 |
| ·E.coli DH5α/pET32a-hrpA中质粒的提取 | 第30-31页 |
| ·PCR引物序列合成 | 第31页 |
| ·扩增hrpA基因 | 第31-32页 |
| ·DNA回收纯化 | 第32页 |
| ·hrpA基因与载体的酶切 | 第32-33页 |
| ·hrpA基因和载体的连接 | 第33页 |
| ·E.coli BL21感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| ·pGEX-6p-1-hrpA载体的转化 | 第34页 |
| ·重组载体菌落PCR和酶切验证 | 第34-35页 |
| ·重组载体的序列验证 | 第35页 |
| ·融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第35-37页 |
| ·融合蛋白的诱导表达与分析 | 第35-36页 |
| ·TRX-HrpA融合蛋白的割胶纯化 | 第36-37页 |
| ·GST-HrpA融合蛋白的割胶免疫 | 第37页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第37页 |
| ·抗HrpA单链抗体库的构建 | 第37-44页 |
| ·小鼠血清效价的测定 | 第37-38页 |
| ·小鼠脾脏RNA的提取 | 第38-39页 |
| ·PT-PCR反转录合成cDNA | 第39-40页 |
| ·V_H基因和V_L基因的扩增 | 第40-41页 |
| ·ScFv的组装 | 第41-42页 |
| ·ScEv基因与pCANTAB-5E载体的双酶切 | 第42-43页 |
| ·ScEv基因与载体的连接 | 第43页 |
| ·噬菌体单链抗体文库的构建 | 第43-44页 |
| ·噬菌体单链抗体文库的PCR验证 | 第44页 |
| ·抗HrpA单链抗体的初步鉴定 | 第44-51页 |
| ·重组噬菌体的制备 | 第44-45页 |
| ·噬菌体单链抗体库的淘选 | 第45-46页 |
| ·ELISA筛选抗HrpA单链抗体 | 第46-47页 |
| ·ELISA检测抗HrpA单链抗体特异性 | 第47页 |
| ·阳性克隆的定量分析 | 第47页 |
| ·单链抗体转植物载体的构建 | 第47-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-68页 |
| ·E.coli BL21/pGEX-6p-1-hrpA载体的构建 | 第51-53页 |
| ·hrpA基因的PCR扩增 | 第51页 |
| ·pGEX-6p-1-hrpA重组载体的PCR和酶切验证 | 第51-53页 |
| ·载体的测序结果分析 | 第53页 |
| ·融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第53-57页 |
| ·pGEX-6p-1-hrpA重组载体融合蛋白的诱导表达 | 第53-54页 |
| ·TRX-HrpA融合蛋白的诱导表达与纯化 | 第54-56页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第56-57页 |
| ·抗HrpA单链抗体库的构建 | 第57-62页 |
| ·小鼠血清效价测定 | 第57-58页 |
| ·小鼠脾脏RNA的提取 | 第58-59页 |
| ·V_H基因和V_L基因的扩增 | 第59-61页 |
| ·ScFv的组装 | 第61页 |
| ·噬菌体单链抗体库的构建与PCR验证 | 第61-62页 |
| ·抗HrpA单链抗体的初步鉴定 | 第62-68页 |
| ·噬菌体单链抗体库的淘选 | 第62-63页 |
| ·ELISA筛选抗HrpA单链抗体 | 第63-64页 |
| ·ELISA检测抗HrpA单链抗体特异性 | 第64-65页 |
| ·阳性克隆的定量分析 | 第65-66页 |
| ·单链抗体转植物载体的构建 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-72页 |
| ·融合蛋白表达载体 | 第68页 |
| ·小鼠免疫 | 第68-69页 |
| ·酶联免疫测定实验 | 第69页 |
| ·RNA的提取 | 第69-70页 |
| ·噬菌体单链抗体库的构建 | 第70页 |
| ·噬菌体单链抗体库的淘选 | 第70-71页 |
| ·抗HrpA单链抗体的鉴定 | 第71-72页 |
| 5 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 附录 | 第80-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
