摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-8页 |
缩略语 | 第8-9页 |
目录 | 第9-11页 |
第一章 引言 | 第11-21页 |
·昆虫嗅觉系统 | 第11-13页 |
·昆虫嗅觉系统功能简介 | 第11-12页 |
·昆虫的化学感受器结构和功能简介 | 第12-13页 |
·气味结合蛋白简介及研究进展 | 第13-14页 |
·家蚕触角结合蛋白(ABP)的研究方法 | 第14-15页 |
·结晶方法研究进展 | 第15-18页 |
·结晶方法概述 | 第15-16页 |
·结晶溶剂的选择 | 第16-18页 |
·实验方案设计 | 第18-21页 |
·研究的目的和意义 | 第18页 |
·研究内容 | 第18-20页 |
·实验流程图 | 第20-21页 |
第二章 天然家蚕触角结合蛋白(ABP)的纯化研究 | 第21-34页 |
·材料 | 第21-25页 |
·仪器 | 第21页 |
·试剂 | 第21页 |
·主要试剂的配制 | 第21-25页 |
·实验方法 | 第25-29页 |
·样品脱糖 | 第25页 |
·酶解 | 第25页 |
·Resource S 层析实验 | 第25-26页 |
·Resource Q 层析实验 | 第26页 |
·凝胶过滤层析实验 | 第26-27页 |
·BCA 法定量蛋白浓度 | 第27页 |
·双向电泳 | 第27-29页 |
·质谱鉴定 | 第29页 |
·结果 | 第29-33页 |
·Resource S 分离纯化峰图及 SDS-PAGE 鉴定 | 第29-30页 |
·Resource Q 分离纯化峰图及 SDS-PAGE 鉴定 | 第30页 |
·凝胶过滤层析分离纯化峰图及 SDS-PAGE 鉴定 | 第30-31页 |
·双向电泳检测及质谱鉴定 | 第31-32页 |
·质谱鉴定结果分析 | 第32-33页 |
·讨论 | 第33-34页 |
第三章 ABP 基因的生物信息学分析 | 第34-39页 |
·序列与工具 | 第34页 |
·序列 | 第34页 |
·生物信息学工具与软件 | 第34页 |
·生物信息学分析结果 | 第34-38页 |
·ABP 基因序列比对 | 第34-35页 |
·保守结构预测 | 第35页 |
·ABP 蛋白同源性分析 | 第35-36页 |
·信号肽分析 | 第36页 |
·跨膜区预测分析 | 第36页 |
·疏水性预测分析 | 第36-37页 |
·二级结构预测 | 第37页 |
·ABP 蛋白的高级结构预测分析 | 第37-38页 |
·讨论 | 第38-39页 |
第四章 ABP 在大肠杆菌中的克隆表达、分离纯化及结晶条件初筛 | 第39-54页 |
·材料与试剂 | 第39-41页 |
·材料 | 第39页 |
·试剂 | 第39页 |
·配置主要试剂 | 第39-41页 |
·实验方法 | 第41-47页 |
·ABP 基因的获得 | 第41-43页 |
·重组表达载体 pET-32a-ABP(无 SP)的构建 | 第43-44页 |
·重组质粒 pET-32a-ABP 在大肠杆菌中诱导表达 | 第44-46页 |
·纯化与鉴定重组融合蛋白 | 第46页 |
·BCA 定量法及双向电泳分析 | 第46-47页 |
·结晶条件初筛 | 第47页 |
·结果 | 第47-52页 |
·PCR 扩增 ABP 基因 | 第47页 |
·重组质粒 pET-32a-ABP 的鉴定 | 第47-48页 |
·重组质粒的原核表达 | 第48-49页 |
·表达蛋白的纯化 | 第49-50页 |
·双向电泳分析 | 第50-52页 |
·结晶条件初筛结果 | 第52页 |
·讨论 | 第52-54页 |
第五章 融合蛋白的蛋白互作分析 | 第54-57页 |
·材料与试剂 | 第54页 |
·材料 | 第54页 |
·试剂 | 第54页 |
·所用试剂配制准备 | 第54页 |
·方法 | 第54-55页 |
·准备融合蛋白样品 | 第54页 |
·全蛋白溶液样品的制备 | 第54页 |
·His-Pull down | 第54-55页 |
·样品检测 | 第55页 |
·结果和分析 | 第55-56页 |
·讨论 | 第56-57页 |
第六章 融合蛋白制备多克隆抗体的 | 第57-61页 |
·材料和试剂 | 第57页 |
·材料 | 第57页 |
·试剂准备 | 第57页 |
·方法 | 第57-59页 |
·抗原的制备 | 第57-58页 |
·免疫动物 | 第58页 |
·制备兔子多克隆抗血清 | 第58页 |
·测定制备的抗血清的效价 | 第58-59页 |
·Western blot 检测抗体的特异性 | 第59页 |
·结果 | 第59-60页 |
·抗体的效价检测 | 第59-60页 |
·抗体 Western blot 检测结果 | 第60页 |
·讨论 | 第60-61页 |
结论 | 第61-62页 |
参考文献 | 第62-65页 |
感言 | 第65页 |