| 符号说明 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 引言 | 第14-34页 |
| ·辣椒疫霉菌的研究进展 | 第14-16页 |
| ·辣椒疫病的危害情况 | 第15页 |
| ·辣椒疫病传播途径及发病规律 | 第15页 |
| ·辣椒疫霉菌的生理生化特性 | 第15-16页 |
| ·辣椒疫病的防治 | 第16页 |
| ·植物病原菌产生的细胞壁降解酶的研究进展 | 第16-20页 |
| ·植物病原菌产生的细胞壁降解酶种类 | 第16-19页 |
| ·角质酶 | 第17页 |
| ·半纤维素酶 | 第17-18页 |
| ·纤维素酶 | 第18页 |
| ·果胶质酶 | 第18-19页 |
| ·植物病原菌细胞壁降解酶在致病过程中的作用 | 第19-20页 |
| ·植物病原菌细胞壁降解酶的作用机制 | 第20页 |
| ·阿魏酸酯酶的研究进展 | 第20-24页 |
| ·阿魏酸和阿魏酸酯酶 | 第20-21页 |
| ·阿魏酸酯酶的发现 | 第21页 |
| ·阿魏酸酯酶的种类 | 第21-23页 |
| ·阿魏酸酯酶的基本性质 | 第23页 |
| ·阿魏酸酯酶的结构和催化机理 | 第23-24页 |
| ·阿魏酸酯酶的功能 | 第24页 |
| ·TAIL-PCR技术 | 第24-26页 |
| ·引物的设计 | 第24-25页 |
| ·TAIL-PCR产物分析 | 第25页 |
| ·TAIL-PCR的优点以及技术难点 | 第25-26页 |
| ·农杆菌介导的基因瞬时表达体系 | 第26-28页 |
| ·农杆菌瞬时表达的原理 | 第26-27页 |
| ·PVX表达载体 | 第27-28页 |
| ·基因沉默技术 | 第28-29页 |
| ·转录水平的基因沉默 | 第28页 |
| ·转录后水平的基因沉默 | 第28-29页 |
| ·卵菌基因沉默研究进展 | 第29-33页 |
| ·卵菌沉默机制 | 第30-31页 |
| ·卵菌稳定沉默 | 第31页 |
| ·卵菌转化技术研究进展 | 第31-33页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶的研究意义 | 第33-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-56页 |
| ·材料 | 第34-37页 |
| ·辣椒疫霉菌株 | 第34页 |
| ·菌株与质粒 | 第34页 |
| ·酶和生化试剂 | 第34页 |
| ·仪器 | 第34页 |
| ·培养基 | 第34-35页 |
| ·溶液配制 | 第35-37页 |
| ·实验方法 | 第37-56页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因克隆 | 第37-42页 |
| ·辣椒疫霉菌株SD33总DNA提取 | 第37页 |
| ·辣椒疫霉菌株SD33总RNA的提取和cDNA的合成 | 第37-38页 |
| ·紫外检测RNA产率和纯度 | 第38页 |
| ·反转录cDNA第一链的合成 | 第38-39页 |
| ·TAIL-PCR法扩增全长 | 第39-41页 |
| ·基因全长克隆 | 第41-42页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因序列分析和系统进化分析 | 第42-43页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因的鉴定 | 第42页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因序列分析和生物信息学分析 | 第42页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因序列比对和系统进化分析 | 第42-43页 |
| ·辣椒疫霉PcFAE基因在不同发育阶段和侵染不同时期的表达模式分析 | 第43-46页 |
| ·辣椒疫霉不同发育阶段和侵染不同时期的样品的获得 | 第43页 |
| ·总RNA的提取和cDNA的合成 | 第43-44页 |
| ·紫外检测RNA产率和纯度 | 第44页 |
| ·反转录cDNA第一链的合成 | 第44页 |
| ·RT-PCR | 第44-45页 |
| ·荧光定量PCR | 第45-46页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因农杆菌瞬时表达 | 第46-49页 |
| ·引物设计 | 第46-47页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因PVX表达载体构建 | 第47-48页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因瞬时表达载体农杆菌转化 | 第48-49页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因农杆菌瞬时表达接种辣椒和烟草 | 第49页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因稳定沉默和过量表达 | 第49-56页 |
| ·引物设计 | 第49-51页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因稳定转化载体构建 | 第51页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因稳定转化重组载体质粒提取 | 第51-52页 |
| ·辣椒疫霉菌转化步骤 | 第52-53页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因沉默和过量表达转化子的筛选和验证 | 第53页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因沉默和过量表达转化子的表型分析 | 第53-54页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因沉默和过量表达转化子的致病性分析 | 第54-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-82页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因的克隆结果 | 第56-59页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因TAIL-PCR扩增结果 | 第56-59页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE1基因TAIL-PCR扩增结果 | 第56-57页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE2基因TAIL-PCR扩增结果 | 第57-58页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因全长序列PCR扩增结果分析 | 第58-59页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因序列分析和系统进化分析 | 第59-65页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因的鉴定 | 第59-60页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因的序列分析及生物信息学分析 | 第60-63页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因的序列比对和系统进化分析 | 第63-65页 |
| ·辣椒疫霉PcFAE基因在不同发育阶段和侵染不同时期的表达模式分析 | 第65-67页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因农杆菌瞬时表达 | 第67-70页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因PVX载体构建及农杆菌转化 | 第67-69页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因农杆菌转化子在辣椒体内瞬时表达 | 第69页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因农杆菌转化子在烟草体内瞬时表达 | 第69-70页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因稳定沉默 | 第70-76页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因沉默转化子的获得 | 第70-72页 |
| ·辣椒疫霉PcFAE沉默转化子的表型分析 | 第72-75页 |
| ·辣椒疫霉PcFAE沉默转化子的致病性测定 | 第75-76页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因过量表达 | 第76-82页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因过量表达转化子的获得 | 第76-77页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因过量表达转化子的表型分析 | 第77-80页 |
| ·辣椒疫霉阿魏酸酯酶PcFAE基因过量表达转化子的致病性测定 | 第80-82页 |
| 4 结论与讨论 | 第82-85页 |
| ·辣椒疫霉PcFAE基因克隆及序列分析 | 第82页 |
| ·辣椒疫霉PcFAE基因在不同发育阶段和侵染不同时期的表达模式分析 | 第82-83页 |
| ·辣椒疫霉PcFAE基因PVX表达后农杆菌接种症状差异 | 第83页 |
| ·辣椒疫霉PcFAE基因沉默和过量表达后对生物表型和致病性的影响 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-94页 |
| 附录 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第96页 |
