| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-32页 |
| ·除草剂的应用与发展 | 第13-15页 |
| ·抗药性杂草的发生与发展 | 第15-19页 |
| ·杂草抗药性机理 | 第19-20页 |
| ·杂草对ALS抑制剂类除草剂的抗药性 | 第20-27页 |
| ·ALS与ALS抑制剂类除草剂 | 第20-21页 |
| ·杂草对ALS抑制剂抗性的发生和发展 | 第21-23页 |
| ·ALS基因突变与杂草抗药性 | 第23-24页 |
| ·ALS与ALS抑制剂分子间的相互作用 | 第24-27页 |
| ·苯磺隆简介 | 第27-28页 |
| ·荠菜生物学特性及抗药性荠菜的发生和发展 | 第28-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-56页 |
| ·供试材料背景 | 第32页 |
| ·整株法测定荠菜对苯磺隆的抗性水平 | 第32-33页 |
| ·供试药剂 | 第32页 |
| ·药剂配置 | 第32页 |
| ·整株法测定 | 第32-33页 |
| ·荠菜ALS离体活性测定 | 第33-34页 |
| ·供试荠菜的培养 | 第33页 |
| ·溶液配制 | 第33页 |
| ·ALS的提取 | 第33-34页 |
| ·ALS离体活性测定 | 第34页 |
| ·ALS活性抑制率的计算 | 第34页 |
| ·数据处理 | 第34页 |
| ·荠菜抗性种群(Cx-R_1)与敏感种群(Cx-S_1)靶标酶基因差异研究 | 第34-48页 |
| ·供试荠菜的培养 | 第34-35页 |
| ·菌株与载体 | 第35页 |
| ·主要仪器设备 | 第35页 |
| ·常用培养基及溶液配制 | 第35-37页 |
| ·荠菜总RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第37-39页 |
| ·荠菜总RNA的提取 | 第37-38页 |
| ·荠菜总RNA得率及纯度检测 | 第38页 |
| ·荠菜总RNA完整性鉴定-琼脂糖凝胶电泳 | 第38-39页 |
| ·ALS基因的扩增 | 第39-43页 |
| ·ALS基因中间片段引物设计与合成 | 第39-40页 |
| ·PCR扩增反应体系与条件 | 第40页 |
| ·目的条带凝胶电泳检测 | 第40页 |
| ·PCR产物的回收 | 第40-41页 |
| ·PCR回收产物的连接 | 第41-42页 |
| ·PCR连接产物的转化 | 第42页 |
| ·阳性克隆的鉴定与测序 | 第42-43页 |
| ·荠菜ALS cDNA 3’和5’端扩增(RACE) | 第43-47页 |
| ·RACE引物的设计与合成 | 第44页 |
| ·RACE PCR扩增反应体系和条件 | 第44-47页 |
| ·3’RACE PCR扩增反应体系和条件 | 第45-46页 |
| ·5’RACE PCR扩增反应体系和条件 | 第46-47页 |
| ·反应产物的检测、回收、克隆和鉴定 | 第47页 |
| ·荠菜ALS cDNA全长的鉴定分析和突变位点的查找 | 第47-48页 |
| ·荠菜抗性种群(Cx-R_1)与敏感种群(Cx-S_1)的靶标酶基因表达差异研究 | 第48-56页 |
| ·供试药剂及生化试剂 | 第48页 |
| ·供试材料 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| ·RNA的提取以及反转录 | 第48-50页 |
| ·RNA的提取 | 第48-50页 |
| ·RNA完整性、纯度和浓度测定 | 第50页 |
| ·荧光定量引物的设计与合成 | 第50-54页 |
| ·荠菜内参肌动蛋白β-actin基因的克隆与鉴定 | 第50-51页 |
| ·荠菜β-actin基因扩增所需引物设计 | 第50-51页 |
| ·荠菜β-actin基因扩增 | 第51页 |
| ·反应产物的检测、回收、克隆和鉴定 | 第51页 |
| ·内参基因以及目的基因的引物设计与验证 | 第51-54页 |
| ·内参基因以及目的基因的引物设计 | 第51-52页 |
| ·内参基因以及目的基因的引物常规PCR验证 | 第52-53页 |
| ·内参基因与目的基因引物的融解曲线分析 | 第53-54页 |
| ·内参基因与目的基因引物的扩增效率验证 | 第54页 |
| ·应用SYBR Green方法分析Cx-R_1和xX-S_1在不同施药时间的靶标酶基因表达 | 第54-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-63页 |
| ·整株法测定荠菜对苯磺隆的抗性水平 | 第56页 |
| ·离体条件下ALS酶活性测定 | 第56-57页 |
| ·荠菜抗性种群(Cx-R_1)与敏感种群(Cx-S_1)靶标酶基因差异性研究 | 第57-60页 |
| ·RNA的纯度和完整性分析 | 第57-58页 |
| ·荠菜ALS cDNA全长的获得与鉴定分析 | 第58-60页 |
| ·抗性种群(Cx-R_1)与敏感种群(Cx-S_1)的靶标酶基因(ALS)表达差异研究 | 第60-63页 |
| ·荠菜内参肌动蛋白β-actin基因的克隆与鉴定 | 第60页 |
| ·荧光定量PCR中内参基因与目的基因引物设计与验证 | 第60-62页 |
| ·内参基因与目的基因引物的普通PCR验证 | 第60-61页 |
| ·目的基因与内参基因引物的融解曲线分析 | 第61页 |
| ·内参基因与目的基因引物的扩增效率验证 | 第61-62页 |
| ·Cx-R_1和Cx-S_1在不同施药时间的靶标酶基因表达分析 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-68页 |
| ·小麦田杂草荠菜对苯磺隆的抗性水平 | 第63页 |
| ·荠菜ALS离体活性测定 | 第63-64页 |
| ·荠菜对苯磺隆抗性的分子机制(靶标酶基因位点突变) | 第64-66页 |
| ·靶标酶的过量表达与荠菜对苯磺隆抗性的相关性 | 第66-67页 |
| ·对本课题后续研究的一些设想 | 第67页 |
| ·本论文的创新之处 | 第67-68页 |
| 5 结论 | 第68-69页 |
| 6 参考文献 | 第69-78页 |
| 7 致谢 | 第78-79页 |
| 8 攻读学位期间发表论文情况 | 第79页 |
